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IRM-2小鼠全长cDNA文库的构建及鉴定
目的 分离和鉴定IRM-2小鼠辐射抗性相关基因.方法 采用SMART技术构建IRM-2小鼠全长cDNA文库,提取雄性IRM-2小鼠脾脏总RNA,以此为模板,通过逆转录酶PowerScript反转录合成第1链cDNA,通过长距离PCR合成并扩增双链cDNA.该扩增产物经纯化、Sfi I酶切、去除小于500 bp片段后,将cDNA连接到sfi I消化过的PDNR-LIB质粒载体中,用电转化法将重组质粒转化到大肠杆菌DH5α,得到IRM-2小鼠cDNA原始文库并用PCR法对文库的质量进行鉴定.随机从cDNA文库挑选130个阳性克隆进行测序,与GenBank基因库进行同源性比较.结果 构建的cDNA文库的容量为2.25×106个克隆,重组率达95%,平均插入片段长度约1.2 kb,全长基因比例为55%.从cDNA文库挑选的阳性克隆中有21条EST序列与小鼠已知基因不同源,在GenBank的EST数据库的注册号为DW474856～DW474876.结论 成功构建了IRM-2小鼠全长cDNA文库,21条EST提示IRM-2小鼠体内可能存在辐射抗性相关基因,为进一步分离和鉴定辐射抗性相关基因奠定了基础.
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浅述IRM-2近交系小鼠生物学特性与应用前景
目的对IRM-2近交系小鼠的生物学特性、血液生理指标、G-显带核型及自发畸变率、γ射线半数致死剂量(LD50)、造血功能三项指标的测定和肿瘤易感性进行了研究.方法采用自动光电血球计数仪计数、小鼠骨髓制备和G显带法,对137Cs γ射线的LD50测定及小鼠经4.0Gy137 Cs γ射线照射后不同时期骨髓的有核细胞总数、脾指数、脾结节的变化;采用肿瘤的瘤块及悬液接种.结果IRM-2小鼠血液生理指标稳定,个体间差异较小;G显带核型结构畸变分析,断裂占0.33%;无着丝粒畸变和不平衡易位均为0.08%,自发畸变率低.LD5o雄性为7.17Gy,雌性为7.5Gy,与ICR和615小鼠比较,有非常显著的差异,对电离辐射具有更强的耐受性.造血功能三项指标均显著高于ICR和615小鼠,CFU-S数比ICR和615小鼠分别高出一倍和三倍.接种恶性淋巴瘤连续传152代、移植乳腺癌瘤株75代、肺腺癌瘤株5代,成瘤率均为100%.自发性恶性淋巴瘤具有较强的特异性.
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IRM-2小鼠SPF核心保种群的建立
目的 为建立我国SPF级IRM-2小鼠核心群,以满足科研、生产及检定工作不断发展的需要,对普通级IRM-2小鼠进行了剖腹净化.方法 采用剖腹摘取子宫术,在无菌隔离器内操作、饲养和繁殖.结果 建立了具有12只SPF级IRM-2小鼠核心群,种群生长发育正常.经2次微生物检测,符合SPF级标准.结论 通过剖腹技术成功地建立了SPF级IRM-2小鼠核心保种群.
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三种小鼠骨髓细胞辐射抗性的比较
目的 对IRM-2、ICR及615小鼠骨髓细胞体外照射后细胞损伤进行比较研究,探讨IRM-2小鼠的抗辐射损伤机制.方法用常规法进行外周血白细胞和骨髓有核细胞计数; 应用化学发光法检测不同剂量γ射线对小鼠骨髓细胞活力的影响;用PA法 (FITC-Annexin V和PI标记法) 检测骨髓细胞凋亡.结果 IRM-2小鼠骨髓细胞和外周血白细胞计数高于ICR、615小鼠,经统计学处理后差异有显著性 (P<0.01).经1 Gy、4 Gy 照射后6 h,IRM-2、ICR、615小鼠骨髓细胞相对活力分别为86.6%和79.3%,77.5%和70.4%,77.4%和68.7%,IRM-2小鼠与ICR、615小鼠比较,细胞活力有所提高,IRM-2小鼠骨髓造血细胞死亡率及凋亡率低于ICR及615小鼠.结论 IRM-2小鼠有较强的免疫及造血功能,骨髓造血细胞凋亡率低于ICR及615小鼠,其抗辐射机制仍需进一步研究.
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IRM-2近交系小鼠的血液学及血清生物化学研究
目的测定正常成年近交系小鼠IRM-2的一些血液学和血清生物化学参数.方法用自动光电血球计数仪测定分析了IRM-2小鼠的血细胞成分及相关参数;用半自动生化分析仪测定了血清常用的13项生化指标;并进行了常规法骨髓细胞的分类.结果雌、雄小鼠各10只,平均生化指标及活度分别为:ALT:39.1 U/L 和44.1 U/L, AST:128.2 U/L 和113.0 U/L, ALP:117.7 U/L 和76.5 U/L,GLU:4.2 mmol/L和4.7 mmol/L,TG:0.79 mmol/L和 0.73 mmol/L,CHO:2.9 mmol/L和 3.5 mmol/L, TP: 29.4 g/L 和 28.1 g/L, ALB:21.2 g/L 和18.9 g/L,BUN:5.29 mmol/L和 5.0 mmol/L,CRE:52.1 μmol/L 和 51.0 μmol/l, Ca:6.8 mg/dl和 7.0 mg/dl,P:7.4 mg/dl和7.7 mg/dl, TBIL:38 μmol/L和 38 μmol/L.外周血检测为RBC:9.5×1012/L和9.1×1012/L, WBC:10.3×109/L和 9.5×109/L,PLT:485(109/L 和604×109/L,粒细胞(包括杆状核和分叶核)分别占21.2%和 31.7%,白细胞中的淋巴细胞分别占78.7% 和68.2%.骨髓象中粒系统占45%,红系统占22%.结论从这些结果可以看出,IRM-2近交系小鼠的血液生理、血液生化指标较稳定,个体差异较小,适合用作辐射损伤动物模型和肿瘤放射治疗动物模型及其他研究.
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IRM-2小鼠全长cDNA编码蛋白质分析
目的 分离和鉴定IRM-2小鼠辐射抗性相关基因.方法 以IRM-2小鼠的21条表达序列标签为模板进行PCR扩增,从IRM-2小鼠全长cDNA文库中测定cDNA克隆的序列,通过与GenBank进行同源序列信息比对,对全长cDNA编码的蛋白质进行分析.结果 从IRM-2小鼠全长cDNA文库中获得5条全长cDNA序列,与小鼠已知基因不同源,得到了可能编码蛋白质的氨基酸序列和蛋白质的理化性质等信息.结论 通过对全长cDNA编码的蛋白质进行分析,提示IRM-2小鼠体内可能存在目前尚未发现的辐射抗性相关基因.
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17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯联合γ射线照射对不同品系小鼠的抑瘤作用
目的 对比观察17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯(DHEA)对不同品系小鼠肺腺癌的抑瘤作用及探讨合用137Cs γ射线照射是否具有抑瘤增效作用.方法 将LA795肺腺癌细胞用生理盐水稀释为浓度约3.5×107/ml瘤细胞,接种于近交系IRM-1和IRM-2小鼠腋下,0.2 ml/只,24 h后分别将IRM-1和IRM-2荷瘤小鼠随机分为8组:对照组、单照组、DHEA(低、中、高剂量)组和DHEA(低、中、高剂量)联合照射组.DHEA组与DHEA联合照射组采取腹腔给药,每日1次,连续7d.其中,DHEA联合照射组于给药的第4日进行全身1 Gy照射,每日1次,连续5d.观察DHEA联合γ射线照射对小鼠肺腺癌的抑瘤效果及对相关免疫学指标的影响.结果 DHEA低、中、高剂量组对IRM-1荷瘤小鼠的抑瘤率分别为38.05％、49.33％和48.18％,与对照组比较差异有统计学意义(t=3.417,4.929和4.889,P均＜0.01),联合137Csγ射线照射后的抑瘤率分别为56.98％、64.44％和62.72％,与对照组比较差异有统计学意义(t=5.475,5.770和6.165,P均＜0.01).DHEA低、中、高剂量组对IRM-2小鼠的抑瘤率分别为42.73％、70.91％和67.73％,其中,中、高剂量组与对照组比较差异有统计学意义(t=3.239和3.062,P均＜0.01),联合137Csγ射线照射后的抑瘤率分别为63.63％、75.00％和68.64％,与对照组比较差异有统计学意义(t=2.834,3.426和3.156,P分别为＜0.05,＜0.01和＜0.01).结论 DHEA对不同品系小鼠肺腺癌细胞均有抑制作用,联合γ射线照射后的抑瘤疗效比单纯DHEA组更为明显.
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E838及其联合放化疗对IRM-2小鼠自发淋巴瘤的抑制作用
目的 观察E838及其联合放化疗对IRM-2小鼠自发淋巴瘤的抑制作用及对骨髓有核细胞数的影响.方法 放疗组采取2～3 mm3瘤块接种于小鼠腋部皮下.化疗组采用1∶ 3(生理盐水)比例制成细胞悬液,每只小鼠前肢腋窝下皮下接种0.2 mL,建立小鼠肿瘤模型.放疗组在24 h后将荷瘤小鼠随机分为对照组、单放组、E838 100,150,200 μg/0.2 mL(低、中、高)治疗组及药物合用照射组;化疗组分为对照组、环磷酰胺(CTX)组、E838低、中、高治疗组及合用CTX组.治疗组连续7 d腹腔注射给药,合用照射组于给药的第4天进行全身137Cs γ射线1Gy照射,1次/d,连续5 d.实验第12天时处死小鼠,剥离瘤体测瘤重,计算抑瘤率.合用化疗组于24 h后开始给药(CTX 500 μg/0.2 mL),隔日1次,共4次.实验第12天处死小鼠,剥离瘤体测瘤重,计算抑瘤率.结果 E838(低、中、高)合用137Cs γ射线能提高抑瘤效果,抑瘤率分别为65.43%,77.13%和67.55%,比E838治疗组(低、中、高)分别升高21.29%,6.39%,17.55%,抑制率比照射组提高42.83%,差异有统计学意义(P<0.001).q值分别为1.03,0.95和1.00,显示与γ射线合用有相加作用.合用CTX的抑瘤率分别为81.68%,82.70%,82.14%,比治疗组分别升高42.9%,36.19%,40.05%,抑制率比CTX组提高21.0%,差异有统计学意义(P<0.001).q值分别为1.07,1.04和1.06,与CTX合用有相加作用.结论 E838对IRM-2小鼠自发淋巴瘤具有抑制作用,E838联合放化疗能提高抑瘤效果.
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IRM-2小鼠cDNA文库的全长cDNA序列分析
目的 分析IRM-2小鼠全长cDNA文库的cDNA序列.方法 根据IRM-2小鼠的21条EST,从IRM-2小鼠全长cDNA文库测定基于该21条EST序列PCR扩增的全长cDNA序列,通过与GenBank基因库同源序列信息比对,分析全长cDNA序列和性质.结果 根据21对引物PCR产物的拼接,获得5条全长cDNA序列,与小鼠已知基因不同源,而且得到了可能编码蛋白质的氨基酸序列和蛋白质的性质.结论 5条全长cDNA序列提示IRM-2小鼠体内可能存在辐射抗性相关基因,为进一步分离和鉴定辐射抗性相关基因奠定了基础.
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IRM-2小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养和生物学特性
目的 分离原代培养IRM-2小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs),从本质上揭示IRM-2小鼠的辐射抗性.方法 分离IRM-2小鼠MEFs,并进行原代培养和传代培养.观察MEFs生长形态,测定第3代和第5代细胞生长曲线、细胞周期和增殖指数.结果 IRM-2小鼠在胎龄14～16 d进行原代MEFs分离,MEFs在体外为贴壁生长型细胞,6代前MEFs生长良好.第3代和第5代MEFs在培养至第3天开始进入对数生长期,到第6天时细胞数达到高峰.MEFs增殖活跃,第3代和第5代细胞增殖指数分别为53%和46%.结论 成功分离、培养了IRM-2小鼠MEFs,为进一步利用MEFs研究小鼠的辐射抗性机制奠定了基础.
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IRM-2近交系小鼠血液学常规指标的测定
目的 建立IRM-2小鼠不同周龄血液学指标正常参考值,为该小鼠的应用提供基础数据.并与亲代鼠及C57BL/6J小鼠血液学指标进行对比研究.方法 用血液学常规检查法对不同周龄、不同性别的IRM-2小鼠WBC、RBC、PLT、BMC进行检测,并对亲代鼠及C57BL/6J小鼠白细胞分类进行测定.结果 得到不同周龄、不同性别IRM-2小鼠血液学指标正常参考值范围;各组雌、雄性小鼠间血液学前三项指标均无显著性差异;7、14周龄时雄性小鼠BMC高于雌性小鼠,差异有统计学意义(P＜0.01),14周龄,雌、雄性小鼠的四项指标均高于其他周龄组,其中BMC与其他组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).18周龄小鼠BMC有所下降,56周龄时小鼠的BMC均低于其他各组.与615、ICR、C57BL小鼠比较,IRM-2小鼠白细胞总数及骨髓有核细胞数均高于其三品系小鼠,有显著性差异(P＜0.01),四种小鼠的白细胞分类计数基本一致,无显著性差异.结论 IRM-2小鼠血液学指标受性别影响和随年龄发生变化,IRM-2小鼠造血功能较强,可作为新的小鼠近交系应用于医学生物学研究.
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IRM-2、C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型免疫学特性的比较研究
目的 观察IRM-2、C57 BL/6小鼠肿瘤模型的免疫学特性.方法 取Lewis肺癌组织,用生理盐水稀释成2×106/ml,取细胞悬液,接种小鼠腋下,0.2ml/只,观察荷瘤鼠生存期、外周血白细胞分类及淋巴细胞分型,并与健康小鼠进行比较.结果 IRM-2荷瘤鼠的平均生存时间为25.5d,C57BL/6荷瘤鼠为24.5d,IRM-2荷瘤鼠CD 4、CD 8值低于IRM-2健康鼠.C57 BL/6荷瘤鼠CD 4、CD8值高于C57BL/6健康鼠,IRM-2小鼠的CD4/CD8比值小于1,C57 BL/6比值大于1.两种荷瘤小鼠的CD11b均高于健康小鼠.结论 IRM-2小鼠CD4/CD8比值小于1,C57BL/6小鼠CD4/CD8比值大于1,IRM-2小鼠与C57BL/6小鼠免疫学功能有明显的差异.
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E838提高肿瘤化疗药物疗效及抗免疫抑制作用的研究
目的 观察E838联合环磷酰胺(CTX)抗淋巴瘤(LM)及其对CTX的减毒作用.方法 建立LM荷瘤小鼠模型,实验分对照组、CTX、不同浓度E838组、不同浓度E838+CTX组,比较各组间的差别.结果 所有E838治疗组瘤重明显小于对照组,联合用药组各项实验指标均好于CTX组.结论 E838对LM有抑制作用,并对CTX有增效及提高机体免疫作用.
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E838对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少症的防治研究
目的 观察E838对环磷酰胺(Cy)所致IRM-2小鼠白细胞(WBC)减少症和造血功能的影响.方法 实验设对照组、E838低、中、高三个剂量组、阳性对照茜草双酯组,连续5d给药,从第3d注射给予Cy,连续3d,观察外周血白细胞、骨髓有核细胞数、内源性脾结节形成(CFU-S)、脾脏指数及胸腺指数的变化.结果 E838各组的外周血白细胞、骨髓有核细胞数与对照组相比有明显的增高,中、高剂量组与对照组比较,经统计学处理差异有显著性(P<0.01).CFU-S与对照组比较差异有显著性(P<0.01).脾脏指数及胸腺指数均高于对照组,高剂量组脾脏指数与对照组比较差异有显著性(P<0.05).结论 E838有显著改善机体免疫功能和刺激骨髓造血功能的作用,能明显增加小鼠WBC的数量.
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E838联合环磷酰胺抗白血病L1210细胞的作用
目的 观察E838及其与化疗药物环磷酰胺(CTX)联合应用对白血病L1210细胞荷瘤小鼠的肿瘤抑制及生命延长作用. 方法 以L1210荷瘤IRM-2小鼠为模型,实验分对照组、CTX组、E838组、E838+CTX组,分别检测肿瘤抑制率、骨髓有核细胞数、胸腺与脾指数、生命延长率等指标,比较各组间的差别. 结果 E838治疗组瘤重明显小于对照组,联合用药组对荷瘤小鼠白血病L1210有较强抑制作用.生命延长也有提高作用. 结论 E838对白血病L1210有抑制作用,与化疗药物CTX合用时,能提高疗效及机体免疫功能.
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E838联合γ射线对淋巴瘤荷瘤小鼠的协同抑瘤作用
目的 本研究主要观察E838对小鼠移植性淋巴瘤的体内抑瘤效果及相关的生物学指标,探讨合用137Csγ射线是否具有抑瘤增效作用.方法 取2～3 mm 3 淋巴瘤瘤块接种于IRM-2小鼠腋部皮下,24h后将荷瘤小鼠随机分为对照组、单放组、E838低、中、高药物组及药物合用照射组、环磷酰胺组.药物组与药物合用照射组对应性腹腔注射相同剂量E838,每日1次,连续7天,环磷酰胺隔日1次×4.合用照射组于给药的第4天进行全身1Gy照射,每日1次,连续5天.观察各组小鼠骨髓有核细胞数和肿瘤抑制率.结果 E8383个剂量对小鼠移植性淋巴细胞瘤的抑瘤率分别为(44.14±15.96)%、(70.74±11.17)%和(50.00±18.09)%,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.001),骨髓有核细胞数与对照组相比则明显提高.E838合用 137 Cs γ射线能提高抑瘤效果,抑瘤率分别为(65.43±2.13)%、(77.13±6.38)%和(67.55±11.17)%,(P＜0.001),对肿瘤的杀伤作用高于单放组和单药治疗组.结论 E838对小鼠肿瘤细胞具有良好的抑制作用,E838合用γ射线具有协同抑瘤作用,在适当剂量范围内可以促进荷瘤小鼠放疗后骨髓损伤修复.
