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重组人胰岛素样生长因子Ⅰ的纯化及鉴定
目的:纯化在大肠杆菌中表达的重组人胰岛素样生长因子Ⅰ(rhIGF-Ⅰ),并对其性质进行鉴定.方法:发酵表达菌株,提取包涵体,采用离子交换和凝胶过滤两步纯化,从相对分子质量、免疫学性质、荧光光谱、N端15个氨基酸的序列分析等方面进行鉴定.另外,对重组蛋白进行了复性和生物学功能的检测.结果与结论:纯化后rhIGF-Ⅰ纯度可达99%以上,相对分子质量、免疫印迹、荧光光谱及N端15个氨基酸的分析结果与预计的相同,rhIGF-Ⅰ促细胞生长的ED50为3～10 ng/ml.
关键词： 重组人胰岛素样生长因子Ⅰ 纯化 复性 氨基酸序列 -
重组人胰岛素样生长因子Ⅰ对成骨细胞的影响
背景:人胰岛素样生长因子Ⅰ在成骨细胞中含量丰富,与骨密度有密切关系.目的:观察重组人胰岛素样生长因子Ⅰ对体外培养大鼠成骨细胞的增殖、凋亡及碱性磷酸酶合成的影响.方法:不同质量浓度重组人胰岛素样生长因子Ⅰ刺激体外培养的大鼠成骨细胞,噻唑蓝法测定活细胞数量;肿瘤坏死因子α单独或与重组人胰岛素样生长因子Ⅰ共同刺激成骨细胞,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,采用对硝基酚磷酸盐法测定细胞裂解液中碱性磷酸酶活性.结果与结论:与对照组相比,一定剂量的重组人胰岛素样生长因子Ⅰ能明显增加大鼠成骨细胞数量(P < 0.05),在质量浓度为0.1~100 μg/L时,成骨细胞数量的增加与质量浓度呈正相关;肿瘤坏死因子α在0.1~100 μg/L范围内呈剂量依赖性地促进成骨细胞凋亡(P < 0.05),并使S期细胞减少(P < 0.05),而重组人胰岛素样生长因子Ⅰ能抑制肿瘤坏死因子α对成骨细胞的促凋亡作用(P < 0.05);与对照组相比,重组人胰岛素样生长因子Ⅰ刺激的成骨细胞碱性磷酸酶的活性明显增高(P < 0.05).重组人胰岛素样生长因子Ⅰ对大鼠成骨细胞有明显的促增殖作用,且能明显抑制肿瘤坏死因子α诱导的大鼠成骨细胞凋亡,提示增加成骨细胞数量可能是重组人胰岛素样生长因子Ⅰ促进骨形成的机制之一;重组人胰岛素样生长因子Ⅰ能促进大鼠成骨细胞碱性磷酸酶的合成,提示重组人胰岛素样生长因子Ⅰ有可能促进骨基质的合成和钙化.
