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基于质谱的银屑病免疫复合物鉴定技术的建立
目的 建立基于质谱的血清免疫复合物(IC)鉴定技术,研究机体自身免疫病的发生机制.方法 以银屑病为模式,采用自身配对设计,用protein A/G beads与血清及组织裂解液混合物进行孵育,免疫沉淀抗原抗体复合物,并用质谱鉴定.结果 对实验中关键参数进行了摸索和优化,建立了鉴定IC的方法.利用建立的方法测定48份银屑病患者的混合血清样本,鉴定出360个IC自身抗原,为过去鉴定的8倍.结论 建立了银屑病血清IC鉴定技术,为今后开展银屑病的分子机制和临床诊治研究提供了依据.
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使用不同组织裂解液提取人心房组织膜蛋白的研究
目的:寻找一种适用于Western boltting 实验的提取人心房组织膜蛋白的组织裂解液的配制方法.方法:配制两种不同的组织裂解液A、B.应用组织裂解液A、B及Bio-Rad公司提取膜蛋白的试剂盒,分别对人右心耳组织进行膜蛋白提取,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对蛋白进行分离,免疫印迹法检测SK2膜蛋白的表达,比较三种裂解方法的裂解效果.结果:三种不同的裂解方法提取的膜蛋白.其中用组织裂解液A和组织裂解液B提取的膜蛋白能满足Western blotting的实验要求,比用试剂盒提取的方法实验效果好.结论:组织裂解液A和组织裂解液B可作为人心房组织提取SK2膜蛋白的组织裂解液.
关键词: 组织裂解液 膜蛋白提取 Western blotting -
不同组织裂解液对细胞因子ELISA检测的影响
目的 研究不同组织裂解液对ELISA检测细胞因子浓度的影响.方法 RIPA、PBS及ELISA试剂盒自带的稀释液分别用于稀释IFNγ,IL-10,1L-6,TNFα细胞因子的标准品,并对标准品进行检测.结果 RIPA稀释液显著抑制IFNv标准品检测结果.结论 ELISA检测细胞因子时需要根据检测的细胞因子的不同,选择相应的裂解液对样本进行处理.