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人LDHA基因文献资料
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人LDHA原核表达载体的构建、蛋白纯化及活性鉴定
目的 构建带GST标签的人乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)基因原核表达载体并纯化GST-LDHA融合蛋白,为进一步研究该基因在肿瘤中的作用作准备.方法 以人乳腺文库为模板,通过PCR扩增LDHA基因片段;利用EcoRⅠ及HindⅢ酶切带GST标签的载体及LDHA基因PCR产物,并连接形成GST-LDHA重组质粒进行测序;GST-LDHA重组质粒转化入Rossate感受态,并加入合适比例的IPTG进行小量诱导,通过Western印迹检测GST-LDHA蛋白表达;诱导成功的GST-LDHA重组质粒转化入Rossate感受态细胞进行大量增菌,IPTG诱导蛋白表达,利用GST琼脂糖凝胶4B亲和珠纯化GST-LDHA蛋白,并用考马斯亮蓝染色检测,获得纯度较好的蛋白.结果 获得大小约1000 bp的LDHA基因;GST-LDHA重组质粒构建成功;诱导GST-LDHA融合蛋白的表达并纯化获得纯度较好的融合蛋白.结论 成功获得带GST标签的人LDHA基因的原核表达产物,为进一步研究LDHA在肿瘤中的作用奠定了基础.
