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多基因串联表达载体文献资料
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应用Red重组技术构建四环素抗性多基因串联表达载体
目的 构建一种四环素抗性的多基因串联表达载体.方法 设计同源臂引物,通过重叠延伸 PCR获取含四环素抗性基因的打靶序列,应用pKD46介导的Red重组系统,在DH5α内替换多基因串联表达载体pET-m28a( + )中的抗性基因序列;再利用同尾酶(isocaudarner)策略,将sfp和accA1两基因串联组合于pET-mt28a( + )中,并进行共表达鉴定.结果 获得了含四环素抗性的重组质粒pET-mt28a( + );构建了两基因串联重组质粒pET/sfp/accA1-mt28a( + ),且两基因能够在同一载体上协同表达.结论 成功构建了一种四环素抗性表达载体pET-mt28a( + ),并可介导多基因的协同表达,为红霉素合成通路在大肠杆菌中的重建奠定了基础.
