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HCV核心蛋白诱导肝细胞侵袭性的体外研究
目的:探讨HCV核心蛋白对肝细胞侵袭性的影响.方法:构建HCV核心蛋白真核表达载体pIRES-core,稳定转染L02细胞,通过间接免疫荧光和Western印迹方法检测核心蛋白的表达,电镜观察肝细胞的形态变化,用体外迁移侵袭力实验测定转染HCV核心蛋白肝细胞的迁移侵袭的能力.结果:未转染细胞L02和转染空载体细胞相比,转染HCV核心蛋白细胞表达基质金属蛋白酶诱导物(EMMPRIN)的水平升高,并且该细胞的迁移侵袭能力明显升高(P<0.01).结论:HCV核心蛋白可能通过上调EMMPRIN的表达以提高肝细胞的迁移侵袭能力,为进一步探讨核心蛋白如何诱导肝细胞侵袭性奠定了基础.
关键词： 肝炎病毒 病毒核心蛋白质类 基质金属蛋白酶诱导物 侵袭性 -
耐药逆转剂对人乳腺癌细胞P-糖蛋白、EMMPRIN和MMP表达的影响
目的 观察耐药逆转剂川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对人乳腺癌MCF7/Adr细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、基质金属蛋白酶诱导物(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)和基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases 2,MMP2)、MMP9表达的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测药物对MCF7/Adr细胞的毒性作用;荧光分光光度法测定细胞内阿霉素(adriamycin,ADM)的荧光强度;Real time RT-PCR和Western blot检测细胞P-gp、EMMPRIN、MMP2和MMP9 mRNA和蛋白水平的变化.结果 TMP与ADM联合作用于细胞,与单用ADM相比,ADM对细胞的杀伤效应及细胞内ADM的荧光强度明显升高(P＜0.05),且有浓度依赖性;与对照组相比,ADM能上调细胞P-gp、EMMPRIN和MMP2、MMP9蛋白表达;TMP能抑制ADM对细胞P-gp、EMMPRIN、MMP2和MMP9蛋白和mRNA水平的上调作用.结论 TMP在有效逆转肿瘤多药耐药的同时,还能抑制ADM对P-gp、EMMPRIN、MMP2和MMP9的上调.
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糖基化终产物对小鼠成骨样细胞基质金属蛋白酶诱导物基因表达的影响
目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对小鼠成骨样细胞基质金属蛋白酶诱导物(EMMPRIN)表达的影响.方法 在培养的小鼠成骨细胞株(MC3T3-E1)中分别加入不同浓度(50、100、200及400 mg/L)的AGEs干预24 h和同一浓度(200 mg/L)的AGEs干预12、24及48 h,以无血清培养基(α-MEM)和相应浓度的牛血清白蛋白(BSA)为对照.用RT-PCR法检测EMMPRIN mRNA的表达水平.结果 不同浓度和不同时间的AGEs干预的EMMPRIN mRNA水平与对照组相比均有显著差异(P＜0.01);AGEs组EMMPRIN mRNA表达呈时间和浓度依赖性升高(P＜0.05).结论 AGEs以时间及浓度依赖的方式增加小鼠成骨细胞EMMPRIN mRNA的表达,AGEs可能通过调节成骨细胞EMMPRIN的表达参与骨质疏松的发病.
关键词： 糖基化终产物 小鼠成骨样细胞 基质金属蛋白酶诱导物 基因表达 骨质疏松 -
糖基化终产物对小鼠巨噬细胞基质金属蛋白酶诱导物表达、分泌及基质金属蛋白酶9活性的影响
目的 探讨糖基化终产物对小鼠巨噬细胞基质金属蛋白酶诱导物表达、分泌及基质金属蛋白酶9活性的影响.方法在培养的小鼠巨噬细胞株(J774A.1)中分别加入不同浓度(50、100、200及400 mg/L)的糖基化终产物干预24 h和同一浓度(200 mg/L)的糖基化终产物干预12、24及48 h,以无血清培养基和相应浓度的牛血清白蛋白为对照.用逆转录聚合酶链方法检测基质金属蛋白酶诱导物mRNA的表达,用酶联免疫吸附法检测上清中基质金属蛋白酶诱导物蛋白水平,用酶谱法检测上清中基质金属蛋白酶9的活性.结果 糖基化终产物干预组的基质金属蛋白酶诱导物mRNA表达水平和上清中蛋白水平与对照组比较差异有显著性,且随时间和浓度增加而增加(P<0.05).糖基化终产物干预组的上清中基质金属蛋白酶9的活性与对照组比较差异有显著性,且随时间和浓度增加而增加(P<0.05).结论 糖基化终产物促进小鼠巨噬细胞基质金属蛋白酶诱导物mRNA表达、蛋白分泌及基质金属蛋白酶9的活性;提示糖基化终产物可能通过调节巨噬细胞基质金属蛋白酶诱导物表达、分泌及基质金属蛋白酶9的活性而影响糖尿病动脉粥样硬化斑块的稳定性.
