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膨化脱毒处理后蓖麻籽粕中蓖麻毒素的检测
目的 检测膨化脱毒蓖麻籽粕中的残余毒素.方法 蓖麻籽粕经过粉碎、匀浆及离心后得到匀浆上清,应用酶联免疫吸附分析(ELISA)、免疫印迹、金标免疫层析试纸检测蓖麻籽粕在PBST匀浆上清中的蓖麻毒素;应用细胞生长抑制实验测定蓖麻籽粕在生理盐水匀浆上清的细胞毒性.结果 经双夹心ELISA检测蓖麻原粕匀浆含有较高浓度的蓖麻毒素,达到0.25 mg/g;对细胞生长有明显的抑制作用;应用蓖麻毒素检测试纸显示强阳性条带.应用试纸条检测经加热膨化处理后的样品只显示微弱条带.ELISA检测结果表明加热膨化处理后蓖麻籽粕中的毒素含量明显下降,脱毒率达到99%以上.加热膨化处理后样品的匀浆上清在高浓度时对细胞生长仍有一定抑制作用,但与原粕比较细胞毒性明显下降;应用免疫印迹检测蓖麻籽粕结果与ELISA和细胞实验结果一致.结论 本研究将ELISA、免疫印迹和免疫层析试纸相结合,建立了有效检测蓖麻籽粕中残余蓖麻毒素的方法,为蓖麻籽粕脱毒处理样品的质量检测及其应用提供了实验依据.
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脱毒蓖麻籽粕中蓖麻毒素的提取及测定
目的 优化双夹心ELISA法检测蓖麻籽粕中蓖麻毒素含量检测方法,并对方法学进行必要的验证.方法 以蓖麻籽粕中蓖麻毒素的含量为指标,对提取溶剂、蓖麻籽粕与溶剂体积比、提取时间、提取过程是否匀浆进行单因素实验,选取佳提取条件.在佳提取条件下对方法的精密度和准确度进行验证.结果 优化出双夹心ELISA法检测蓖麻籽粕中蓖麻毒素的佳提取溶剂为含0.1％ Tween 20的磷酸盐缓冲液(PBST),提取溶剂体积为1∶10(质量/体积),匀浆后提取浸泡时间为1h.该方法特异性高,蓖麻籽粕中杂质成分对测定无干扰.蓖麻毒素在3.91 ～ 250μg/L浓度范围内线性关系良好,日内和日间精密度测定的相对标准偏差(RSD)值分别小于3.2％和11.8％.同一样品重复测定日间RSD值小于5.5％.结论 蓖麻籽粕中的残余蓖麻毒素可采用优化后的实验方法进行有效提取,应用双夹心ELISA方法进行毒素含量的定量分析,该方法为蓖麻籽粕脱毒工艺的确定及脱毒样品的质量控制提供了技术支持.
