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RelB shRNA慢病毒感染小鼠骨髓树突细胞的免疫学效应观察
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非经典性NF-κB活性在慢性B淋巴细胞白血病中的作用
目的 探讨非经典性NF-κB信号通路在慢性B淋巴细胞白血病(B-CLL)中的作用.方法 采用实时荧光定量RT-PCR法检测56例B-CLL初诊患者骨髓CD5+CD19+细胞(CLL-B细胞)NF-κB家族成员mRNA表达水平;采用TransAMTMELISA法定量分析CLL-B细胞核中NF-κB蛋白质复合物的活性成分;采用流式细胞术分析CLL-B细胞体外单独或与骨髓基质细胞(hBMSC)共培养后细胞死亡率;采用Western blot法检测共培养对骨髓CLL-B细胞中NF-κB家族成员RelA和RelB蛋白水平表达的影响.结果 CLL-B细胞的NF-κB家族成员RelA、p50、RelB和p52 mRNA水平均高于正常B细胞,差异有统计学意义(P值均＜0.01).所有标本中CLL-B细胞都存在RelA活化,而RelB只在部分标本中活性增强.CLL-B细胞核中平均RelA活性比正常B细胞显著增强,而平均RelB活性与正常B细胞相似.体外单独培养24、48和72 h时,RelA +/RelB-组CLL-B细胞死亡率分别为(35.54±4.43)％、(50.92±8.44)％和(49.24±8.16)％;RelA+/RelB+组CLL-B细胞死亡率分别为(20.65±2.37)％、(18.17±1.36)％和(26.55±4.08)％.与hBMSC共培养,RelA+/RelB-组CLL-B细胞死亡率较单独培养时下降,但相对于RelA+/RelB+组CLL-B细胞死亡率仍较高;共培养48 h后,RelA+/RelB-组CLL-B细胞中RelA和RelB显著上调,RelA+/RelB+组中CLL-B细胞质中RelA表达上调,RelB在胞质中显著下调并在胞核中轻度上调.结论 骨髓CLL-B细胞中存在非经典性NF-κB的活化,RelB活化程度在不同的CLL-B细胞中差异显著;RelB和RelA活化共表达赋予骨髓CLL-B细胞存活优势,CLL-B细胞与hBMSC共培养,通过诱导CLL-B细胞中RelA和RelB的表达发挥对其体外存活的保护作用.
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核转录因子RelB对慢性B淋巴细胞白血病细胞蛋白酶体抑制剂敏感性的影响
目的 探讨核转录因子RelB对慢性B淋巴细胞白血病(B-CLL)细胞蛋白酶体抑制剂敏感性的影响.方法 以初诊B-CLL患者CD5+CD19+细胞为研究对象,用RT-PCR法检测NF-κB家族成员RelB mRNA的表达水平;采用凝胶迁移实验及TransAMTMELISA法分析细胞核中RelB的活性;根据CLL细胞RelB活性将细胞分为RelB阳性(RelB+)和RelB阴性(RelB-)两组,与人骨髓基质细胞共培养,分别加入氟达拉滨(10 μmol/L)、MG-132(1 μmol/L)和硼替佐米(1μmol/L)作用不同时间,采用碘化丙锭染色法分析药物对RelB+和RelB-细胞死亡率的影响.结果 CLL细胞存在RelB mRNA表达及RelB活化,不同CLL细胞RelB mRNA表达水平及RelB活化水平不一.与骨髓基质细胞共培养时,三种药物均可促进细胞死亡,并具有时间依赖性.氟达拉滨对RelB+和RelB-组CLL细胞的杀伤活性无明显差异,作用72 h后,两组CLL细胞死亡率分别为(61.11±6.91)％和(67.57±9.45)％;MG-132处理72 h对RelB+细胞的杀伤活性高于RelB-组,两组细胞死亡率分别为(66.22±3.39)％和(51.07±5.93)％;硼替佐米处理24及48 h对RelB+细胞杀伤活性高于RelB-组.24 h,两组细胞死亡率分别为(75.50±4.66)％和(66.32±10.20)％;48 h,死亡率分别为(92.11±3.14)％和(85.84±5.81)％.结论 骨髓来源CLL细胞中存在以RelB为代表的非经典性NF-κB活性.RelB活性增强可增加CLL细胞对蛋白酶体抑制剂硼替佐米和MG-132的敏感性,而对氟达拉滨的敏感性无明显影响.
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RelB shRNA慢病毒感染小鼠骨髓树突状细胞的免疫学效应
背景:沉默树突状细胞发育成熟的关键基因核因子кB/RelB可构建新型致耐受树突状细胞? 目的:探讨RelB shRNA转染小鼠骨髓树突细胞的生物免疫学功能的影响.方法:利用重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组白细胞介素4联合诱导小鼠骨髓树突状细胞;慢病毒载体将RelB shRNA转染致小鼠骨髓树突细胞后,分为未成熟树突状细胞、脂多糖刺激成熟、RelB基因沉默及脂多糖刺激RelB沉默的4组树突状细胞进行观察.结果:体外培养第 6 天脂多糖刺激组细胞表面可见大量细长的类似树枝的突起,其他3组细胞形态特征相似,呈圆形、皱缩状态,这3组细胞表面MHC-II类分子、CD86和CD40分子表达水平相当,但低于脂多糖刺激组;3组混合淋巴细胞反应中刺激T细胞增殖能力差异无显著性意义(P > 0.05),但均较脂多糖刺激组显著降低(P < 0.01);RelB基因沉默的树突状细胞分泌Th1细胞因子γ-干扰素和白细胞介素2的能力较低,分泌Th2白细胞介素10和白细胞介素4的能力较高(P < 0.01),Th1/Th2细胞因子的比例与未成熟树突状细胞类似.说明RelB shRNA经慢病毒转染骨髓源性树突状细胞后,在细胞形态、表面分子表达、免疫学功能等方面均具有与未成熟树突状细胞相似的特点,且不能被脂多糖刺激成熟.
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脓毒症中的基因沉默
炎症性疾病中基因表达的重编程被认为是危重病医学中的一个具有重要临床意义的概念.脓毒症及其后续症重症脓毒症,脓毒性休克以及多器官功能不全(衰竭)共同的病理生理机制是机体促炎和抗炎反应失控引起的严重全身炎症反应.基因重编程引起急性促炎基因沉默在脓毒症的发生发展中起着重要的作用.现将从以下三方面综述脓毒症中基因沉默的发生:①急性促炎基因的重编程;②急性促炎基因沉默的可能机制;③急性促炎基因沉默的组织异质性.
