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人MD-2/GST融合蛋白在大肠杆菌的表达
构建人髓样分化蛋白-2(human myeloid differentiaton protein-2,hMD-2)与谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione-S-transferase,GST)的融合蛋白(hMD-2/GST)表达载体PGEX-4T-1/hMD-2,在大肠杆菌中融合表达hMD-2/GST.以真核表达载体PEF-BOS/hMD-2为模板,用PCR法在MD-2编码序列上下游引入酶切位点和终止密码子;将hMD-2编码序列克隆入原核表达载体PGEX-4T-1的相应酶切位点;用PCR和酶切筛选、鉴定重组质粒PGEX-4T-1/hMD-2,并对插入基因片断测序;重组质粒PGEX-4T-1/hMD-2转化大肠杆菌,经IPTG诱导后用SDS-PAGE分析表达产物.结果PCR、酶切鉴定和序列测定证实MD-2编码序列正向插入原核表达载体PGEX-4T-1的相应酶切位点,片断与PCR扩增产物大小相同、序列无误、阅读框架正确;SDS-PAGE证实hMD-2/GST在大肠杆菌中表达,表达量约占菌体总蛋白的30%.说明成功构建了PGEX-4T-1/hMD-2载体,hMD-2/GST融合蛋白在大肠杆菌中得到初步表达,为MD-2后续研究作了必要的准备.
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毒素蛋白PE40的基因克隆及序列分析
细胞因子-受体介导的靶向杀伤作为导向治疗白血病与肿瘤的第二代新策略,是现代分子导向药物研究的新领域之一.它是利用细胞因子与其受体的特异性结合来导向传递重组细胞因子-细菌外毒素融合蛋白以达到特异性杀伤高表达相应细胞因子受体的白血病及肿瘤细胞[1～3].从理论上讲,它比以抗原-抗体为主体的第一代导向杀伤策略具有更突出的优势,诸如导向的特异性更高、杀伤性更强、毒副作用更小、费用更低,既克服了耐药性的发生又不会导致继发性肿瘤,从而可避免或弥补放、化疗及造血干细胞移植的诸多缺陷或弊端.
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融合表达载体 pET22b-SUMO-FGFR4的构建及其在大肠杆菌中表达条件的优化
目的：设计合成小泛素修饰物-成纤维细胞生长因子受体4（SUMO-FGFR4）基因，构建 pET22b-SUMO-FGFR4表达载体，并对其表达条件进行优化。方法：采用 Overlap PCR 方法制备 SUMO-FGFR4融合基因，并连接到原核表达载体 pET22b 中，获得 pET22b-SUMO-FGFR4重组表达载体。以乳糖为诱导剂，观察乳糖浓度、诱导时机、诱导温度、诱导时间和乳糖的添加方式等因素对 SUMO-FGFR4蛋白表达量的影响，确定佳诱导条件，并进行重组蛋白的可溶性分析。结果：pET22b-SUMO-FGFR4表达的融合蛋白在相对分子质量40000处显示目标条带，并与 FGFR4抗体特异性结合。融合蛋白在乳糖终浓度为1.0 g·L－1、诱导时间为3 h、诱导时机 A （600）值为0.8、诱导温度为37℃时表达量高，乳糖的添加方式对 SUMO-FGFR4融合蛋白的表达量无明显影响。乳糖作为诱导剂比传统诱导剂 IPTG 诱导 SUMO-FGFR4融合蛋白的表达量高7.5％，融合蛋白以包涵体形式为主。结论：以乳糖作为诱导剂，成功表达了 SUMO-FGFR4融合蛋白，确定了融合蛋白的佳表达条件。
关键词： 小泛素相关修饰物 成纤维细胞生长因子受体 4 重组融合蛋白类 -
人肠生长激素工程菌高效表达培养工艺的研究
为了优化含有人肠生长激素(rh[Gly2]GLP-2)基因的融合表达工程菌pED-h[Gly2]GLP-2高效表达的适培养工艺条件,文章通过摇瓶培养研究了包括培养基组成、初始pH值、接种量、诱导剂,诱导剂浓度、诱导时机及诱导后培养时间等因素对蛋白表达量的影响,确定了该工程菌表达目的蛋白的佳条件,目的蛋白表达量可达40%以上,为基因工程产品的大规模工业化生产提供了一些有价值的数据.
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日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3对日本血吸虫病的诊断价值
目的探讨纯化的日本血吸虫 (中国大陆株) 重组信号蛋白14-3-3 (rSj14-3-3)诊断血吸虫病的价值.方法利用纯化的rSj14-3-3抗原与成虫抗原,间接ELISA法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清.结果急、慢性血吸虫患者血清rSj14-3-3抗体检出率为100%和92.0%,与正常人血清未出现交叉反应;抗AWA抗体检出率为98.0%和94.0%,与正常人有7.3%的交叉反应.结论 rSj14-3-3为抗原诊断日本血吸虫病显示出高度的敏感性和特异性,具有实用价值.
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稳定表达融合基因Hyper-IL-6的肝癌细胞克隆株的建立
Hyper-IL-6是Fischer等依据白细胞介素6受体(interleukin 6 receptor,IL.-6R)的结构信息设计的一种"设计细胞因子( designer cytokines)",即将人类IL-6基因与截短形式的可溶性细胞介素6受体(soluble interleukin 6 receptor,sIL-6R)基因通过基因操作共价连接,并在真核细胞进行表达得到的一种具有超高效IL-6活性的融合蛋白[1].
关键词： 白细胞介素6 Hyper-IL-6 重组融合蛋白类 基因转染
