首页 > 文献资料
-
Exendin-4改善Aβ31-35所致小鼠海马HT22神经细胞Per2节律基因/蛋白异常表达
目的 探讨Exendin-4对β淀粉样蛋白31-35(Aβ31-35)所致HT22细胞Per2节律基因/蛋白表达的影响及机制.方法 HT22细胞分为Aβ31-35处理组(0,2.5,5.0,10.0 μmol/L),Exendin-4单独处理组,Exendin-4预处理组,Exendin-4+Exendin(9-39)预处理组,Exendin-4+Exendin(9-39)处理组,Ex-endin(9-39)单独处理组,以完全培养基培养的细胞为对照组.光镜下观察HT22细胞形态,MTT法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR检测Per2基因的表达,免疫荧光染色观察GLP-1R及PER2蛋白表达.结果 5,10 μmol/L Aβ31-35处理后,细胞存活率较对照组显著降低(P＜0.05).Exendin-4预处理后,5μmol/L Aβ31-35引起的细胞形态结构的改变明显改善,细胞存活率显著提高(P＜0.05).Exendin-4预处理后,Per2基因/蛋白表达在CT(circadian time) 16时较Aβ31-35处理显著提高(P＜0.05);Exendin-4+ Exendin (9-39)处理后,GLP-1R表达在CT16时较Exendin-4处理显著降低(P＜0.05).Exendin-4+Exendin(9-39)预处理后,CT16时PER2蛋白荧光强度较Exendin-4预处理显著降低(P＜0.05).结论 Exendin-4可能通过上调GLP-1R,改善Aβ31-35所致HT22细胞Per2节律基因/蛋白异常表达.
-
[Gly14]-humanin拮抗Aβ31-35引起的大鼠空间学习记忆损伤
淀粉样β蛋白(Amyloid β protein,Aβ)与阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)发病机理密切相关,拮抗Aβ神经毒性或清除脑内沉积的Aβ已成为一个主要的AD治疗策略.本研究采用Morris水迷宫技术,探讨了海马内注射Aβ31-35对大鼠空间学习记忆行为的影响,并在此基础上研究了[Gly14]-humanin (HNG)拮抗Aβ的神经保护作用及其可能机制.结果显示,双侧海马注射2.0 nmol的Aβ31-35后,大鼠定位航行试验中寻找水下平台的平均逃避距离较对照组明显延长;撤除平台后空间探索试验中目标象限内的游泳距离占游泳总距离的百分比明显下降；HNG(0.2和2.0 nmol)预处理拮抗了Aβ31-35所致的逃避距离延长和游泳距离百分比下降；给予酪氨酸激酶抑制剂Genistein (40 nmol)则几乎完全阻断HNG的抗Aβ效应.以上结果表明,HNG 可以剂量依赖性保护大鼠的空间学习记忆免受Aβ伤害,其机制可能与激活内源性酪氨酸激酶途径有关,提示HNG上调酪氨酸激酶信号转导对AD患者认知功能的改善具有重要意义.
-
Humanin通过内源性途径抑制Aβ31-35诱导的神经元凋亡
为了探讨Humanin(HN)对Aβ31-35诱导的培养皮层神经元凋亡的影响,本研究采用不同浓度(5、10、20 μmol/L)的HN预孵育体外培养的皮层神经元不同时间(0、8、16 h),加入Aβ31-35(25μmol/L)24 h后,应用电子显微镜观察神经元的凋亡情况;流式细胞术、TUNEL法检测神经元的凋亡率;酶标仪检测caspase活性;Western blot检测Bax蛋白的表达.结果显示:HN(20 μmol/L)预孵育16 h明显抑制了Aβ31-35诱导的神经元凋亡;HN降低了Aβ31-35诱导的caspase-3、9活性的升高:HN抑制了Aβ31-35诱导的Bax从胞浆到线粒体的转位.以上结果提示,HN通过阻断内源性凋亡途径抑制Aβ31-35诱导的神经元凋亡.
关键词： Aβ31-35 Humanin:凋亡 神经保护 内源性途径 -
D-Ser2-Oxyntomodulin改善Aβ31-35所致小鼠昼夜节律紊乱
目的:观察胃泌酸调节素类似物 D-Ser2-Oxyntomodulin(Oxy) 是否可以改善 β 淀粉样蛋白31-35 (Aβ31-35)所致的小鼠昼夜节律紊乱,探讨Oxy改善Aβ31-35所致昼夜节律紊乱的细胞分子机制.方法: (1) 选取6～8周龄C57BL/6雄性小鼠进行跑轮行为学实验,分析Oxy改善Aβ31-35所致小鼠昼夜节律紊乱的作用.(2)选取小鼠海马HT22神经细胞,CCK8法检测细胞存活率,Real-time PCR检测不同时间点钟基因Bmal1 和Per2 mRNA的变化趋势,Western Blot分别检测CT20时Bmal1蛋白和CT16时Per2蛋白的表达情况.结果: (1) Aβ31-35引起小鼠昼夜节律紊乱,与对照组相比,自由运转周期显著延长.Oxy预处理再给予Aβ31-35后小鼠的昼夜节律紊乱情况有所改善,与Aβ单独给予相比,自由运转周期显著降低.(2) Aβ31-35引起HT22细胞存活率显著降低,Oxy预处理后有效逆转Aβ31-35诱导的细胞存活率下降,且具有剂量依赖性.(3)经Aβ31-35处理后,HT22细胞的Bmal1和Per2 mRNA水平分别在CT20和CT16较对照组明显降低;而Oxy预处理组Bmal1和Per2的异常表达均得到显著改善.(4)与对照组相比,Aβ31-35组CT20时Bmal1和CT16时Per2蛋白水平显著降低;而与 Aβ31-35 组相比,Oxy预处理组 Bmal1 和 Per2 蛋白水平有所升高.结论:Oxy 可能通过调整Bmal1和Per2的表达改善Aβ31-35所致C57BL/6小鼠昼夜节律紊乱.
-
Exendin-4通过拮抗钙超载改善Aβ31-35诱导的HT22海马神经细胞per1基因异常表达
目的:探讨Exendin-4对Aβ31-35所致的HT22神经细胞per1基因异常表达的影响及可能作用机制.方法:本研究采用海马神经细胞HT22作为实验对象.以1％血清饥饿1h来诱导细胞同步化(CT0).MTT实验检测细胞存活率;倒置显微镜下观察细胞形态变化;Rea1-time PCR检测各CT时间per1基因的表达变化;选择per1表达差异显著的CT时间点,采用流式细胞术检测细胞内钙离子浓度的变化情况.结果:(1)Exendin-4可以明显提高Aβ31-35所致的HT22细胞存活率的下降;(2)镜下观察可见,经Exendin-4预处理后部分改善了Aβ31-35对细胞的损伤作用,细胞形态有所恢复;(3)Aβ31-35使per1基因在CT16时各处理组的相对表达量明显不同;与对照组相比,Aβ31-35使per1基因表达量明显升高;经Exendin-4预处理后,per1基因的表达得到一定程度的恢复,差异具有统计学意义;(4)在CT16时各处理组细胞荧光强度值明显不同,与对照组相比,Aβ31-35使细胞荧光强度明显增强;经Exendin-4预处理后,细胞荧光强度值明显降低,差异具有统计学意义,此结果与加入尼莫地平的结果类似.加入尼莫地平预处理后,检测各个CT时间per1基因表达变化,与Exendin-4预处理组得到的结果类似.结论:Exendin-4通过拮抗钙超载改善Aβ31-35诱导的HT22海马神经细胞per1基因的异常表达.
-
炎症反应在S14G-Humanin拮抗Aβ31-35所致大鼠行为学改变中的作用
目的:以小胶质细胞形态和功能的改变为观察指标,探究炎症反应在S14G-Humanin(HNG)拮抗Aβ31-35所致大鼠行为学改变中的神经保护作用.方法:SD大鼠60只随机分为5组,经侧脑室分别注入生理盐水(对照组)、Aβ31-35(Aβ31-35组)、Aβ31-35+HNG(0.01mmol/L)、Aβ31-35+HNG(0.1mmol/L)、Aβ31-35+HNG(1mmol/L).注射第7d行Morris水迷宫实验观察各组大鼠的行为学改变；注射12d后处死大鼠,运用免疫组化法检测海马及皮层的激活小胶质细胞的数量,采用ELISA法检测大鼠海马及皮层组织IL-6的含量.结果:与对照组相比,Aβ31-35组大鼠的学习、记忆能力明显下降(P＜0.05),Aβ31-35+HNG(0.1,lmmol/L)组大鼠的学习、记忆能力有所改善,与Aβ31-35组相比差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,Aβ31-35组的激活小胶质细胞数及IL-6的含量在皮层及海马组织中均增加(P＜0.05)；与Aβ31-35组相比,Aβ31-35+HNG(0.01,0.1,1mmol/L)组皮层及海马的激活小胶质细胞数及IL-6的含量均减少(P＜0.05).结论:S14G-Humanin对Aβ31-35诱导的大鼠行为学改变具有保护作用,而抑制Aβ31-35诱导的小胶质细胞激活产生的炎症反应可能是HNG拮抗Aβ神经毒的机理之一.
-
S14G-Humanin对Aβ31-35所致大鼠行为学及神经元凋亡的影响
目的:研究S14G-Humanin对Aβ31-35所致大鼠行为学及神经元凋亡的影响.方法:SD大鼠60只随机分为5组,经侧脑室分别注入生理盐水(对照组)、Aβ31-35,(Aβ31-35组),Aβ31-35+HNG(0.01 mmol/L),Aβ31-35+HNG(0.1 mmol/L)和Aβ31-35(1 mmol/L).注射第7 d行Morris水迷宫实验观察各组大鼠的行为学改变;注射12 d后处死大鼠,应用TUNEL法检测各组海马神经元的凋亡情况,应用免疫组化法检测神经元caspase-3的表达.结果:与对照组相比,Aβ31-35组大鼠的学习、记忆能力明显下降(P<0.05),Aβ31-35+HNG(0.1,1 mmol/L)组大鼠的学习、记忆能力有所改善,与Aβ31-35组相比差异有统计学意义(P<0.05).Aβ31-35组海马神经元的凋亡指数及caspase-3阳性细胞数均高于正常对照组,Aβ31-35能引起大鼠海马神经元的凋亡及学习、记忆能力的下降;Aβ31-35+HNG(1,0.1,0.01 mmol/L)组凋亡指数及caspase-3阳性细胞数均明显下降,与Aβ31-35组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:S14G-Humanin对Aβ31-35诱导的大鼠海马神经元凋亡及行为学改变具有保护作用.
关键词： Aβ31-35 S14G-humanin 凋亡 行为学 大鼠
