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脐血细胞培养前后的形态改变及神经细胞特有分子表达
目的探讨脐血单个核细胞(MNCs)培养前后的形态改变及神经细胞特有分子表达.方法采用倒置显微镜观察培养过程中脐血MNCs形态的变化,RT-PCR方法检测MNCs培养前后神经细胞标志物nestin,NF-M及MAP2 mRNA的表达.结果培养前,脐血MNCs胞体小呈圆形,培养后细胞胞体变大,有突起形成,相邻细胞连接成网状,类似神经细胞.RT-PCR检测发现,培养前脐血MNCs中的nestin,NF-M及MAP2 mRNA有阳性表达,在培养后表达增强.结论直接分离的脐血MNCs中存在着神经(干)细胞;培养后,出现神经元样细胞,nestin,NF-M及MAP2 mRNA表达增强.
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细胞因子诱导人脐血间充质干细胞分化过程中细胞巢蛋白、神经丝亚单位和端粒酶逆转录酶mRNA的表达
目的:观察细胞因子EGF和bFGF联合诱导人脐血间充质于细胞(MSCs)向神经细胞分化过程中细胞巢蛋白(nestin)、神经丝亚单位M(NF-M)和端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的变化.方法:采集健康自然分娩产妇脐血,密度梯度离心分离单个核细胞(MNCs),PBS洗涤2次后重悬于含体积分数20%胎牛血清的DMEM/F12中,接种于T-75培养瓶内(细胞密度为1×106ml-1),一组加入细胞因子EGF和bFGF,终浓度各为10μg/L,另一组不加细胞因子,剩余细胞用液氮冻存.培养24 h倾去全部液体以除去未贴壁细胞,以后每3 d全量换液1次,倒置显微镜下观察细胞形态.分别收集培养1d、4d、7d、14d贴壁细胞和冻存细胞,采用RT-PCR方法检测nestin、NF-M、hTERT mRNA的表达.结果:未培养的脐血MNCs(内含MSCs)nestin、NF-M、hTERT mRNA均表达阳性.培养后nestin、hTERT mRNA表达下降,至第7 d已不能检出;而NF-M mRNA的表达随培养时间延长而增强.与对照组相比,细胞因子组NF-M mRNA表达较高,nestin、hTERT mRNA表达的下降趋势延迟.结论:细胞因子EGF和bFGF在联合诱导脐血MSCs分化为神经细胞的过程中,能下调hTERT mRNA的表达.
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脐血单个核细胞培养前后神经细胞特有标志物的变化
目的:探讨脐血单个核细胞培养前后神经细胞特有标志物的表达差异.方法:采用RT-PCR方法对脐血单个核细胞培养前后nestin,神经丝亚单位M(NF-M)及微管相关蛋白2(MAP2 mRNA)的表达进行检测.结果:nestin,NF-M及MAP2 mRNA在培养前的脐血单个核细胞中表达呈阳性,培养后3者表达增强.结论:直接分离的脐血单个核细胞中存在着表达神经细胞特有分子的细胞,培养后,神经元样细胞增多.
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神经细胞特有分子在人脐血细胞中的表达
目的: 探讨神经细胞相关标志物nestin,NF-M及MAP2 mRNA在脐血细胞中的表达情况.方法: 采用RT-PCR方法对脐血单个核细胞进行检测.结果: nestin,NF-M及MAP2 mRNA表达在脐血单个核细胞中呈阳性.结论: 脐血单个核细胞中存在着神经干细胞.
