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诱生型一氧化氮合酶在代谢型谷氨酸受体参与老年性痴呆发病中的作用
目的 观察诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric-oxide synthase, iNOS)在Ⅱ组代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptor 2/3, mGluR2/3)参与老年性痴呆(AD)发病过程中的可能作用.方法 将48只SD大鼠随机分为假手术组、AD组和AD+α-甲基-(4-四唑基-苯)甘氨酸(α-methyl-4-tetrazolyl-phenyl,MTPG)组3组,每组16只.AD组与AD+MTPG组经SD大鼠左侧脑室注入凝聚态Aβ25-35制做AD大鼠模型,假手术组以相同操作注射等量蒸馏水.1周后,AD+MTPG组于右侧脑室注射MTPG,AD组和假手术组注射等体积人工脑脊液.5周后取脑组织,应用硫堇染色、免疫组化和原位杂交方法,观察大鼠海马CA1区锥体神经元损伤情况,以及iNOS和iNOS mRNA表达.结果 (1)硫堇染色结果显示:假手术组海马CA1区锥体神经元轮廓清楚,排列整齐;AD组与假手术组相比,锥体神经元数目较少,轮廓欠清,形态不规则; AD+MTPG与AD组相比,神经元形态明显恢复,排列较规则.(2)免疫组化结果显示:假手术组神经元胞质有较弱的iNOS表达;AD组iNOS表达较假手术组明显增强;AD+MTPG iNOS表达较AD组减弱.(3)原位杂交结果显示:3组iNOS mRNA与iNOS表达呈相似的变化趋势.结论 iNOS 在mGluR2/3参与AD发病过程中具重要作用.
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神经元型一氧化氮合酶在Ⅱ组代谢型谷氨酸受体介导的脑缺血耐受中的作用
目的:探讨神经元型一氧化氮合酶(nNOS)催化产生的一氧化氮(NO)在Ⅱ组代谢型谷氨酸受体(mGluR2/3)介导的脑缺血预处理(CIP)保护机制中的作用.方法:36只永久凝闭椎动脉的SD大鼠随机分为6组(n=6):sham、CIP、损伤性缺血、CIP+损伤性缺血、MTPG+CIP和MTPG+CIP+损伤性缺血组.采用硫堇染色和免疫组化观察海马CA1区迟发性神经元死亡(DND)和nNOS表达的变化.结果:与Sham组相比,CIP组海马nNOS表达出现一定程度的上调,而损伤性脑缺血组则出现nNOS表达的明显上调,预先给与CIP可一定程度上防止损伤性脑缺血所致的nN0s表达的过度升高.在MTPC+CIP组,预先侧脑室注射mGluR2/3阻断剂MTPG,可阻断CIP引起的nNOS表达增加,但对神经元的存活无影响.而在MTPG+CIP+损伤性缺血组中,出现大量锥体神经元DND,同时nNOS的表达较MTPG+CIP组明显增加,该增加为损伤性脑缺血所致,而非慨的作用.结论:nNOS催化产生的NO作为mGluR2/3的下游分子参与脑缺血预处理过程中mGluR2/3介导的脑缺血耐受的形成.
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Ⅱ组代谢型谷氨酸受体通过抑制凋亡参与脑缺血耐受的诱导
目的观察Ⅱ组代谢型谷氨酸受体阻断剂α-methyl-(4-tetrazolyl-phenyl) glycine(MTPG)对脑缺血预处理(cerebral ischemic preconditioning,CIP)抗损伤性缺血所致海马神经元凋亡作用的影响.方法 24只SD大鼠采用四血管闭塞法制造大鼠全脑缺血模型.采用Tunel法检测海马CA1区锥体细胞凋亡情况.结果假手术组几乎无阳性细胞表达;损伤性缺血组可见明显的阳性细胞表达和核固缩,阳性细胞数、总面积、平均光密度明显增加(P<0.05);CIP+损伤性缺血组阳性染色细胞数、总面积、平均光密度较损伤性缺血组明显降低(P<0.05);MTPG+CIP+损伤性缺血组阳性染色细胞数、总面积、平均光密度与CIP+损伤性缺血组相比明显增加(P<0.05).结论 mGluR2/3通过抑制凋亡,参与BIT的诱导.
关键词： 脑缺血耐受 凋亡 代谢型谷氨酸受体 α-甲基-(4-四唑基-苯)甘氨酸 海马 -
代谢型谷氨酸受体阻断剂α-methyl-(4-tetrazolyl-phenyl)glycine对大鼠海马脑缺血耐受诱导的影响
实验采用大鼠四血管闭塞全脑缺血模型, 用硫堇染色法和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化法, 观察右侧脑室内注射Ⅱ型代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptor 2/3, mGluR2/3)阻断剂α-methyl-(4-tetrazolyl-phenyl)glycine (MTPG)对海马CA1区神经元缺血耐受(BIT)诱导的影响, 以探讨mGluR2/3在BIT诱导中的作用.54只大鼠椎动脉凝闭后分为5组: (1)假手术组(n=8): 游离双侧颈总动脉, 但不夹闭; (2)单纯缺血组(n=8): 夹闭双侧颈总动脉8 min; (3)缺血预处理组(n=8): 夹闭双侧颈总动脉3 min作为脑缺血预处理(CIP), 再灌注24 h后再行夹闭8 min; (4) MTPG+缺血预处理组(n=22): CIP前20 min右侧脑室注射MTPG, 其余步骤同缺血预处理组; MTPG的剂量分别为0.4、0.2、0.04和0.008 mg, 以观察其剂量效应关系; (5) MTPG+单纯缺血组(n=8): 右侧脑室注射MTPG 0.2 mg 24 h后, 夹闭双侧颈总动脉8 min.所有动物均在手术后或末次缺血后7 d处死, 取材观察.结果如下: (1) 与假手术组相比, 单纯8 min缺血组海马CA1区组织学分级升高、锥体神经元密度降低, GFAP阳性表达增加(P<0.05); (2) 缺血预处理组的组织学分级、神经元密度及GFAP表达与假手术组相似, 未见单纯缺血组的上述变化, 表明CIP可防止后续8 min缺血造成的神经元损伤; (3) MTPG+缺血预处理组海马CA1区组织学分级明显增加、锥体神经元密度降低, 并且GFAP表达也明显增加(P<0.05), 这种变化与MTPG的剂量呈明显正相关, 表明CIP对神经元的保护作用可被MTPG阻断; (4) MTPG+单纯缺血组海马CA1区组织学分级和神经元密度以及GFAP的表达与单纯缺血组相似.上述结果提示, 3 min CIP 可诱导BIT的形成, MTPG可阻断CIP诱导BIT的作用, 表明mGluR 2/3参与BIT的诱导.
