首页 > 文献资料
-
分化抑制因子基因沉默的人尤文肉瘤细胞系的建立
目的 应用短发夹RNA(shRNA)技术,构建分化抑制因子(Id2)基因稳定干扰的人尤文肉瘤细胞系,为进一步研究Id2在尤文肉瘤细胞生长、分化中的作用提供有用模型.方法 体外合成3条Id2序列特异性shRNA,构建pGPU6/GFP/Neo-shRNA-Id2真核表达载体,通过脂质体转染尤文肉瘤RD-ES细胞,采用Western blot方法检测Id2蛋白表达水平,采用细胞计数法检测shRNA转染后对细胞生长的影响,采用流式细胞术检测转染前后细胞周期的变化.结果 Western blot结果显示,稳定转染shRNA-Id2-543及shRNA-Id2-593的RD-ES细胞中Id2表达水平降低,与对照组相比分别下降54％及57％;转染组细胞的生长速度明显减慢,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞周期S期细胞比例分别为(36.60±1.53)％及(44.89±2.46)％,高于对照组的(29.73±2.03)％,差异有统计学意义(P＜0.05),G2期比例无明显变化甚至降低.结论 成功建立Id2基因沉默的人尤文肉瘤RD-ES稳定转染细胞系.Id2表达下调可抑制尤文肉瘤细胞增殖,细胞周期阻滞于S期.Id2可能在尤文肉瘤细胞生长增殖中扮演重要角色.
-
外源性分化抑制因子Id2在C2C12细胞中的表达
目的:构建大鼠Id2基因真核荧光表达载体,并观察外源性Id2基因C2C12细胞中的表达.方法:RT-PCR扩增出Id2全长cDNA,T4 DNA连接酶将载体pGEM-T和Id2 cDNA进行连接,构建克隆载体,经限制性内切酶EcoR I酶切pGEM-Id2克隆载体和pEGFP-C2真核表达载体,构建出重组真核表达载体pEGFP-C2-Id2,经酶切分析、PCR鉴定及DNA测序证实cDNA片段大小和序列的正确性;通过电穿孔转染法将外源性Id2基因导入C2C12成肌细胞中.分别于转染4、8、12、24、36、72 h后通过荧光倒置显微镜下观察细胞整体情况,并计算转染效率.结果:经酶切分析和序列测定证实pEGFP-C2-Id2含大小正确的正向Id2 cDNA片段,获得高转染率和高表达外源性Id2基因的C2C12细胞,转染8h时,转染效率约为(10.5±2.8)％;转染12 h后,转染效率约为(20.9±3.1)％;转染24 h后,转染效率高,约为(60.8±3.2)％.结论:成功构建了同时携带有G418筛选位点和Id2基因的真核表达载体;并获得高表达外源性Id2基因的C2C12细胞.
-
白血病患者白细胞中分化抑制因子Id2mRNA的表达
目的:探讨分化抑制因子Id2基因在白血病白细胞中的表达状况.方法:应用KT-PCR半定量分析16例急性非淋巴细胞白血病(ANLL),10例慢性粒细胞白血病(CML)白细胞中Id2的mRNA表达水平.结果:Id2基因在急性非淋巴细胞和慢性粒细胞白血病患者外周血白细胞中的表达水平均增高,有统计学意义(P<0.05),但两者间比较无统计学意义.结论:Id2基因在白血病细胞中的表达明显增高,可能与白血病的发病有一定相关性.
关键词： Id2基因 白血病 白细胞 逆转录聚合酶链式反应
