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白细胞介素12锚定修饰肿瘤源性外核体肾癌疫苗的制备及其体外抗肿瘤效应
目的 制备白细胞介素12(IL-12)锚定修饰肿瘤源性外核体(EXOs)的肾癌疫苗,探讨其体外对肾癌细胞特异性杀伤效应.方法 将精基化磷脂酰肌醇(GPI)信号肽序列与IL-12基因融合,构建真核双表达质粒pBIG,应用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测融合蛋白(GPI-IL-12)在肾癌细胞中的表达.用超滤和蔗糖/重水密度梯度离心法分离EXOs,透射电镜鉴定其形态.采用Western blot检测其标志性分子热休克蛋白70(HSP70)、细胞间黏附分子(ICAM-1)、肾癌特异性抗原G250和GPI-IL-12的表达.应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定EXOs负载IL-12的量,干扰素γ(IFN-γ)释放试验检测IL-12修饰EXOs(EXO-IL-12)的功能,羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)和碘化丙啶(PI)双标的流式细胞仪分析其对肾癌细胞的诱导杀伤效应.结果 EXOs为类圆碟形、双层膜结构,直径30～80nm,表达HSP70、ICAM-1、G250和GPI-IL-12.ELISA测定结果显示,10μg/ml EXOs含约(80.0±9.6)pg/ml的IL-12.EXO-GPI-IL-12疫苗能显著地促进T淋巴细胞分泌IFN-γ,在体外对肾癌细胞的特异性杀伤率为53.7%,明显高于对膀胱癌细胞(9.8%)和结肠癌细胞的杀伤率(10.8%),差异有统计学意义(P<0.01).结论 EXO-GPI-IL-12疫苗能够在体外诱导T淋巴细胞产生较强的抗原特异性细胞毒作用,可望成为治疗肾癌的新疫苗.
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血清microRNA-21在食管鳞状细胞癌中表达的临床意义
目的 探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)患者血清中外核体microRNA-21(miRNA-21)表达水平的临床意义.方法 从51例ESCC患者(ESCC组)血清中分离出外核体,提取总RNA,通过实时定量PCR技术检测miRNA-21的表达情况.以良性病变且无全身性炎性反应的41例患者作为对照组.结果 ESCC组患者血清中外核体miRNA-21表达水平明显高于对照组患者(P<0.01),而在已去除外核体的剩余血清中检测不到miRNA-21.ESCC患者血清外核体能在体外诱导食管鳞状细胞癌细胞增殖.外核体miRNA-21高表达亚组中年龄≥68岁患者比例、T3/T4型比例、III/IV期患者比例明显高于低表达亚组,而发生癌症转移患者的比例明显降低(P<0.05,P<0.01).结论 ESCC患者血清中外核体miRNA-21表达明显上调,外核体miRNA-21表达水平与肿瘤进展和侵袭性密切相关,提示外核体miRNA-21可能是肿瘤治疗的一个有效靶标.
关键词： 外核体 MicroRNA-21 食管鳞状细胞癌 -
血清microRNA-21在人食管鳞状细胞癌中表达水平及临床意义
目的 探究食管鳞状细胞癌(ESCC)患者血清中外核体(exosomes) microRNA(miRNA)表达水平的临床检测意义.方法 从ESCC患者血清中分离出外核体,提取总RNA,通过实时定量PCR技术检测miRNA-21表达情况.以良性病变且无全身性炎症的患者血清作为对照.结果 ESCC血清外核体能在体外诱导ESCC癌细胞的增殖.ESCC患者血清中外核体miRNA-21表达水平明显高于良性病变患者.而在已去除外核体的剩余血清中检测不到miRNA-21.miRNA-21的表达水平与肿瘤分类、淋巴结阳性、癌症转移和(或)临床分型密切相关.与对照组相比,ESCC患者血清中外核体miR-21的表达明显上调.结论 外核体miR-21的表达水平与肿瘤进展和侵袭性密切相关,提示外核体miR-21可能是肿瘤治疗的一个有效靶标.
