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E2F-1和Rb基因表达与乳腺乳头状瘤病及导管内癌的相关性
目的研究细胞周期调控因子E2F-1和Rb与乳腺乳头状瘤病及导管内癌的相关性,探讨乳头状瘤病癌变的某些分子机制.方法采用原位杂交法和免疫组化法对40例乳腺轻度乳头状瘤病、40例重度乳头状瘤病和40例导管内癌进行了检测,观察E2F-1和Rb基因mRNA和蛋白的表达情况.结果 E2F-1 mRNA表达阳性率在乳腺轻度乳头状瘤病、重度乳头状瘤病和导管内癌中分别为17.5%、45.0%和80.0%;蛋白表达阳性率分别为20.0%、47.5%和77.5%.E2F-1 mRNA和蛋白表达三组间差异有显著性(P<0.01),组间两两比较,差异也有显著性(P<0.01).Rb基因mRNA表达阳性率在乳腺轻度乳头状瘤病、重度乳头状瘤病和导管内癌中分别为90.0%、50.0%和20.0%;蛋白表达阳性率分别为85.0%、52.5%和22.5%.Rb基因mRNA和蛋白表达三组间差异有显著性(P< 0.01),组间两两比较,差异也有显著性(P<0.01).随着乳腺乳头状瘤病程度的加重终进展为癌,E2F-1 mRNA和蛋白表达阳性率呈上升趋势;Rb mRNA和蛋白表达阳性率呈下降趋势.E2F-1和Rb mRNA表达均与蛋白表达呈正相关,但这两种调控因子的表达呈负相关.结论 E2F-1和Rb基因mRNA和蛋白表达可作为癌症早期较有价值的参考指标,有助于从乳腺乳头状瘤病中筛选出高危病例.并提示E2F-1和Rb可能为乳腺癌前病变基因治疗的新靶点.
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E2F-1基因沉默对人胃癌耐药细胞株SGC7901/顺铂多药耐药性的逆转
目的 探讨E2F-1基因沉默后对人胃癌顺铂(DDP)耐药细胞株SGC7901/DDP多药耐药性的影响及可能的作用机制.方法 将人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP接种于6孔板,并分为以E2F-1基因沉默重组慢病毒颗粒Lv-shRNA-E2F-1感染的SGC7901/DDP细胞(实验组)、以对照慢病毒颗粒Lv-shRNA-NC感染的SGC7901/DDP细胞(阴性对照组)以及常规培养的SGC7901/DDP细胞(空白对照组).采用Western blot技术检测各组细胞中E2F-1蛋白的表达,采用四甲基偶氮唑蓝法检测阿霉素、氟尿嘧啶和DDP对各组细胞的半数抑制浓度(IC50),采用流式细胞术检测各组细胞中阿霉素的泵出率和细胞凋亡率,采用半定量RT-PCR和Western blot技术检测各组细胞中多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白(MRP)及凋亡相关基因cyclin D1、c-Myc、Skp2 mRNA和蛋白的表达水平.结果 实验组、阴性对照组和空白对照组SGC7901/DDP细胞中E2F-1蛋白的相对表达量分别为0.794±0.033、1.487±0.082和1.511 ±0.084,实验组SGC7901/DDP细胞中E2F-1蛋白的相对表达量较阴性对照组和空白对照组分别下降46.6％和47.5％ (P ＜0.01).阿霉素、氟尿嘧啶和DDP对实验组SGC7901/DDP细胞的IC50均较阴性对照组和空白对照组明显降低(均P＜0.01).实验组、阴性对照组和空白对照组SGC7901/DDP细胞中阿霉素的泵出率分别为(0.16±0.01)％、(0.37±0.01)％和(0.35±0.02)％,实验组SGC7901/DDP细胞中阿霉素的泵出率明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.01).实验组、阴性对照组和空白对照组SGC7901/DDP细胞的凋亡率分别为(33.82±1.26)％、(17.34±0.81)％和(13.16±1.06)％,实验组SGC7901/DDP细胞的凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.01).与阴性对照组和空白对照组比较,实验组SGC7901/DDP细胞中MDR1、MRP、cyclin D1、c-Myc和Skp2 mRNA及蛋白的表达水平均明显降低(均P＜0.01).结论 沉默E2F-1基因的表达可有效提高人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP对化疗药物的敏感性,并可直接或间接下调经典多药耐药相关基因MDR1和MRP的表达,从而逆转胃癌细胞的多药耐药性,其机制可能与cyclin D1、c-Myc和Skp2的表达下调有关.
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慢病毒RNA干扰E2F-1对人胃癌裸鼠皮下瘤耐药性的影响
目的 观察E2F-1基因沉默的慢病毒载体E2F-1/RNAi-LV对人胃癌裸鼠皮下瘤耐药性的影响.方法 将人胃癌SGC7901-顺铂(DDP)耐药细胞接种于裸鼠皮下,建立人胃癌耐药裸鼠皮下瘤模型.将成瘤的36只裸鼠随机分为E2F-1/RNAi-LV组、LV-scrRNAi组和PBS组,每组12只.隔日向3组裸鼠肿瘤内分别注射E2F-1/RNAi-LV、LV-scrRNAi或PBS,并按体重腹腔注射DDP,共9次.注射期间和处死裸鼠后测量各组裸鼠的肿瘤体积.应用TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡指数,应用半定量RT-PCR和Western blot法检测肿瘤组织中E2F-1、c-Myc、survivin、多药耐药基因1(MDR1)和多药耐药相关蛋白(MRP) mRNA和蛋白的表达.结果 注射慢病毒后,E2F-1/RNAi-LV组肿瘤的生长速度明显减慢.处死裸鼠后,E2F-1/RNAi-LV组裸鼠的肿瘤体积为(745.13±154.42)mm3,明显低于LV-scrRNAi组[(1988.80±171.35) mm3]和PBS组[(1633.48±215.25) mm3,P＜0.05].E2F-1/RNAi-LV组肿瘤组织的凋亡指数为(27.5±9.7)％,明显高于LV-scrRNAi组[(7.0±1.1)％]和PBS组[(7.3±1.2)％,P＜0.05].E2F-1/RNAi-LV组肿瘤组织中E2F-1 mRNA和蛋白的表达量分别为0.40±0.32和0.35±0.01,明显低于LV-scrRNAi组和PBS组(P＜0.05).E2F-1/RNAi-LV组c-Myc、survivin、MDR1和MRP mRNA和蛋白的表达量亦明显低于LV-scrRNAi组和PBS组(均P＜0.05).结论 慢病毒载体E2F-1/RNAi-LV瘤内注射可降低人胃癌SGC7901-DDP耐药细胞对DDP的耐药性,抑制人胃癌耐药裸鼠皮下瘤的生长.
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慢病毒载体介导的E2F-1基因沉默对人胶质瘤U251细胞生物学特征的影响
目的 探讨慢病毒载体介导的E2F-1基因沉默对人胶质瘤U251细胞生物学特征的影响.方法 构建靶向E2F-1的shRNA重组慢病毒载体,将慢病毒载体转染U251细胞,real-time PCR与Western blot在mRNA与蛋白水平鉴定转染结果,MTT方法检测转染后U251细胞活力的变化,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡的变化,transwell实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 real-time PCR方法与Western blot检测结果均表明成功建立了稳定沉默E2F-1基因的U251细胞株.与空白对照组及阴性对照组比较,转染E2F-1-shRNA的U251细胞活力显著降低,细胞周期被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率显著升高,侵袭能力显著降低(P＜0.01).结论 转染E2F-1-shRNA能够显著降低U251细胞增殖侵袭能力.
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E2F-1基因和Rb基因在人肺癌组织中的表达及临床意义
目的:探讨E2F-1和Rb基因在肺癌中的表达及意义.方法:用免疫组织化学技术对广州医学院第二附属医院、广州市胸科医院自2001年1月至2004年12月手术诊断的60例原发性肺癌组织与34例正常肺组织中E2F-1和Rb基因蛋白进行检测,并分析其表达情况.结果:E2F-1在肺癌组织与正常组织中的阳性表达率分别为75.0%(45/60)和41.1%(14/34),两组间差异有显著性(P＜0.05).抑癌基因Rb在正常组织与肺癌组织中的表达缺失率分别为6.3%(2/32)和23.3%(14/60),P＜0.05.E2F-1和Rb表达呈负相关(相关系数r=-0.319,P=0.013).但E2F-1、Rb的表达与肺癌组织学类型、临床分期、分化、淋巴结转移等无关联(P＞0.05).结论:E2F-1基因的过度表达以及Rb基因的表达缺失或减低对肺癌的发生发展起协同促进作用.
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FGFR3、Rb 及 E2F -1在膀胱肿瘤组织中的表达及临床意义
目的：探讨 FGFR3、Rb 及 E2F -1蛋白在膀胱肿瘤组织中的表达及临床意义。方法：以不同浓度的FGFR3、Rb 及 E2F -1蛋白，应用免疫组织化学 SP 法检测122例膀胱肿瘤组织中三种蛋白的表达。结果：FG-FR3和 E2F -1蛋白在膀胱移行细胞癌与乳头状瘤组中表达的阳性率分别为81.5％（75/92）、56.7％（17/30）和70.7％（65/92）、46.7％（14/30），移行细胞癌组的表达明显高于乳头状瘤组，组间差异有统计学意义（ P =0.008；P =0.017）。在移行细胞癌和乳头状瘤中 Rb 蛋白的阳性表达率分别为68.5％（63/92）和93.3％（28/30），移行细胞癌组的表达低于乳头状瘤组，组间差异有统计学意义（P =0.007）。Spearman 等级相关分析显示 FGFR3与 E2F -1蛋白在膀胱肿瘤组织中的表达呈正相关关系（r =1.000，P ＜0.05）。Rb 与 FGFR3、E2F
