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家族性与散发性乳腺癌BRCA1与FANCD2基因相关性的研究
目的:探讨乳腺癌组织BRCA1与FANCD2基因表达,明确BRCA1基因与FANCD2基因之间的相关性.方法:选取104例乳腺癌手术标本,其中家族性乳腺癌52例,散发性乳腺癌52例.采用SP免疫组化法检测BRCA1和FANCD2在家族和散发性乳腺癌组织中的表达.结果:在家族性乳腺癌组织中,BRCA1蛋白阳性表达37例(71.2％),FANCD2蛋白阳性表达18例(34.6％),两组差异有统计学意义,P＜0.05.在散发性乳腺癌组织中,BRCA1蛋白阳性表达19例(36.5％),FANCD2蛋白阳性表达27例(51.9％),两组差异无统计学意义.结论:BRCA1和FANCD2基因表达与乳腺癌的发生和发展存在一定相关性,FANCONI/BRCA 通路的抑制,可能是乳腺癌,尤其是家族性乳腺癌发生发展以及形成的原因之一.
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FANCD2在急性髓系白血病中表达
目的 通过检测急性髓系白血病(AML)中FANCD2蛋白的表达,探讨AML的发病机制及其与预后的关系.方法 选取2007年9月至2015年7月中国医科大学附属第一医院、第四医院血液科收治的AML患者108例,应用免疫组织化学染色方法检测FANCD2蛋白的表达.结果 本组108例AML患者骨髓标本中,FANCD2蛋白在AML初诊组、完全缓解组、复发组及对照组中的阳性表达率分别为6.3％、63.0％、5.0％和71.4％;初诊组与对照组、完全缓解组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);复发组与对照组、完全缓解组比较,差异也均有统计学意义(P＜0.05);而完全缓解组与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);初诊组与复发组比较,差异也无统计学意义(P＞0.05).结论 FANCD2蛋白表达的阳性率可作为AML诊断或预后评估的检测指标,与AML的发生、复发相关.
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FAAP20和RAD51C基因敲减对肺癌细胞顺铂敏感性的影响
目的:研究敲减范可尼贫血(FA)通路上游FAAP20和下游RAD51C基因对人肺癌Calu-1细胞株顺铂敏感性的影响.方法:合成针对FAAP20和RAD51C基因的siRNA(FAAP20-siRNA和RAD51C-siRNA),用脂质体转染试剂将他们分别和同时转染于人肺癌Calu-1细胞株.蛋白质印迹法检测siRNAs转染后细胞FAAP20和RAD51C蛋白的表达以验证转染效率,并检测FANCD2蛋白单泛素化水平;CCK-8法测定转染前后的细胞增殖率;Annexin V/PI流式细胞术测定转染前后细胞凋亡率;免疫荧光法观察转染前后细胞核内FANCD2蛋白核聚小体的形成.结果:与转染前比较,转染FAAP20-siRNA和RAD51C-siRNA后经顺铂处理的Calu-1细胞FAAP20和RAD51C蛋白表达均明显降低,表明转染有效.敲减FAAP20基因后顺铂诱导的FANCD2蛋白单泛素化水平降低,核聚小体形成减少,而RAD51C基因敲减对FANCD2蛋白单泛素化和核聚小体形成并无明显影响.敲减FAAP20或RAD51C基因均可增强顺铂诱导的细胞增殖抑制和细胞凋亡作用,同时共敲减这两个基因则进一步增强顺铂对Calu-1细胞的杀瘤效应.结论:敲减FAAP20和RAD51C基因可增加Calu-1细胞对顺铂的敏感性,FAAP20和RAD51C基因的DNA损伤修复功能并不完全作用在同一条路径(范可尼贫血通路).
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RAD18基因敲除增强肺腺癌细胞对顺铂的敏感性
目的:研究敲除E3泛素连接酶RAD18基因后,人肺腺癌A549细胞株和顺铂耐药A549 (A549/DDP)细胞株FA/BRCA途径DNA修复功能的变化及其对顺铂敏感性的改变.方法:合成针对RAD18基因的siRNA(RAD 18-siR-NA),通过脂质体将其分别转染人A549和A549/DDP细胞株.蛋白质印迹法检测经顺铂处理的两种细胞株转染siR-NA前后RAD18蛋白表达及FANCD2单泛素化水平;CCK-8法测定经顺铂处理的两种细胞株转染siRNA前后细胞增殖率的变化;免疫荧光测定胞核内FANCD2核聚小体的形成;Annexin V/PI流式细胞术测定转染前后细胞凋亡率.结果:与转染RAD18-siRNA前相比,转染后经顺铂处理的A549和A549/DDP细胞株RAD18表达均明显降低;FANCD2蛋白单泛素化水平下调和核聚小体形成减少;同时细胞增殖率明显降低,细胞凋亡率则明显增加.结论:应用RNA干扰技术敲除RAD18基因可通过抑制A549和A549/DDP细胞株FA/BRCA途径的DNA损伤修复功能,增加这两种细胞株对顺铂的敏感性.
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siRNA沉默FANCD2基因增加肺癌A549/DDP细胞对顺铂化疗的敏感性
目的:研究siRNA沉默FANCD2基因后人肺腺癌A549/DDP耐药细胞株对顺铂(DDP)耐药性的变化.方法:合成针对FANCD2基因的siRNA(FANCD2-siRNA),采用脂质体将其分别转染肺癌A549细胞株和A549/DDP耐药细胞株.CCK-8法测定经DDP处理的A549和A549/DDP细胞株转染siRNA前后的细胞增殖率变化;免疫印迹法测定2种细胞株转染siRNA前后FANCD2蛋白单泛素化水平;免疫荧光测定胞核中FANCD2蛋白核聚小体的形成.结果:经DDP处理的A549/DDP细胞增殖率,FANCD2蛋白单泛素化水平及核聚小体形成程度明显高于A549细胞.转染FANCD2-siRNA后,A549和A549/DDP细胞的FANCD2蛋白单泛素化水平和核聚小体形成明显降低,细胞增殖率显著下降.结论:应用siRNA转染技术沉默FANCD2基因可抑制FA/BRCA途径的DNA修复功能,从而增加肺癌细胞对DDP的敏感性,部分逆转耐药肺癌细胞株对DDP的耐药性.
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乳腺癌中BRCA通路相关基因的研究进展
近年来乳腺癌是女性癌症中常见和死亡率高的恶性肿瘤[1].乳腺癌易感基因 BRCA1 和 BRCA2 是与乳腺癌发生有关的重要的抑癌基因,虽然散发性乳腺癌中 BRCA1 和 BRCA2基因突变率不高,但携带 BRCA1 和 BRCA2 基因突变的女性发生乳腺癌的概率却较高.BRCA 基因已成为遗传性乳腺癌的筛查基因,此外也存在其他易感基因与乳腺癌的发生相关.二代测序的发展使多基因检测成为可能,本文就 BRCA 基因及其相互作用的乳腺癌易感基因的新研究进展做相关综述,为乳腺癌的预防与治疗提供理论依据.
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siRNA沉默RAD18抑制结肠癌SW480细胞FANCD2蛋白泛素化并增强其对丝裂霉素C 的敏感性
目的:研究RAD18 特异性siRNA 对结肠癌SW480 细胞FANCD2 泛素化和对化疗药物丝裂霉素C 敏感性的影响.方法:RAD18 特异性siRNA 转染SW480 细胞后用丝裂霉素C 处理,通过Western blot 检测细胞RAD18 及FANCD2 泛素化的表达,MTT 法检测干扰RAD18 后细胞对丝裂霉素C 的敏感性.结果:RAD18 特异性siRNA 转染SW480 细胞96 h 后,RAD18 基因的表达明显降低,导致经丝裂霉素C 处理后FANCD2 泛素化表达明显降低;siRAD18 组细胞对丝裂霉素C 的敏感性显著增强.结论:抑制RAD18 蛋白表达能延缓结肠癌细胞FANCD2 泛素化表达,并增强SW480 细胞对丝裂霉素C 的敏感性.
