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母胎界面趋化因子及其受体的表达与原因不明复发性流产发病的关系
目的：探讨母胎界面趋化因子及其受体的表达与原因不明复发性流产（URSA）发病的关系。方法选择8~10周龄雌鼠建立孕鼠和URSA鼠模型，实验鼠分为6组，每组10只。正常未孕鼠组，处死后获取子宫内膜组织；正常孕鼠胚胎植入期组，妊娠第6天处死后获取子宫内膜组织；正常孕鼠胚胎发育期组，妊娠第14天处死后获取胎盘绒毛和蜕膜组织；URSA鼠胚胎植入期组，妊娠第6天处死后获取子宫内膜组织；URSA鼠胚胎流产前期组，妊娠第9天处死后获取绒毛和蜕膜组织；URSA鼠胚胎流产后期组，妊娠第14天处死后获取绒毛和蜕膜组织。采用蛋白印迹法检测各组实验鼠不同组织中基质细胞衍生因子（CXCL12）、单核细胞趋化蛋白1（CCL2）、正常T淋巴细胞表达和分泌调节活化因子（RANTES）及其相应的受体CXCR4、CCR2、CCR5蛋白的表达。结果（1）CXCL12及CXCR4、CCL2及CCR2、RANTES及CCR5蛋白的表达水平在正常未孕鼠组子宫内膜组织中分别为0.13±0.04及0.18±0.09、0.057±0.023及0.39±0.08、0.034±0.012及0.22±0.05，在正常孕鼠胚胎植入期组内膜组织中分别为0.35±0.09及0.93±0.15、0.349±0.056及0.91±0.15、0.336±0.089及0.44±0.05，在正常孕鼠胚胎发育期组蜕膜组织中分别为0.62±0.15及1.23±0.28、0.283±0.051及0.55±0.09、0.225±0.065及0.35±0.07，正常孕鼠胚胎植入期组内膜组织和正常孕鼠胚胎发育期组蜕膜组织趋化因子及其受体表达水平均显著高于正常未孕鼠组内膜组织，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；正常孕鼠胚胎发育期组蜕膜组织CXCL12及CXCR4蛋白表达水平高于正常孕鼠胚胎植入期组内膜组织，差异有统计学意义（P<0.05），而CCL2及CCR2、RANTES及CCR5蛋白表达水平低于正常孕鼠胚胎植入期组，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。（2）URSA鼠胚胎植入期组内膜组织CXCL12及CXCR4蛋白表达水平（0.20±0.06及0.44±0.11）显著低于正常孕鼠胚胎植入期组，差异有统计学意义（P<0.01）；而CCL2及CCR2（0.451±0.133及1.32±0.20）和RANTES及CCR5（0.488±0.137及0.61±0.18）蛋白表达水平显著高于正常孕鼠胚胎植入期组，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。（3）与正常孕鼠胚胎发育期组蜕膜组织比较，URSA鼠胚胎流产前期组和流产后期组蜕膜组织中CXCL12及CXCR4蛋白表达水平（分别为0.27±0.09及0.26±0.10、0.25±0.08及0.23±0.08）均显著降低，差异均有统计学意义（P<0.01）；而CCL2及CCR2（分别为0.576±0.123及0.92±0.15、0.748±0.112及1.56±0.34）和RANTES及CCR5（分别为0.294±0.054及0.59±0.18和0.363±0.058及0.78±0.14）蛋白表达水平则显著升高，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；URSA鼠胚胎流产后期组CCL2及CCR2和RANTES及CCR5蛋白表达水平显著高于流产前期组，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论母胎界面趋化因子CXCL12、CCL2、RANTES及其受体CXCR4、CCR2、CCR5的精准表达在胚胎种植和发育过程中发挥重要作用；母胎界面绒毛和蜕膜组织中CXCL12及CXCR4蛋白低表达，CCL2及CCR2和RANTES及CCR5蛋白高表达与URSA的发病机制密切相关。
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SDF-1/CXCR4对大肠癌细胞株SW480增殖、迁移及侵袭的影响及意义
目的：探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及其特异性受体CXC趋化因子受体4（CXCR4）对大肠癌细胞SW480增殖、迁移及侵袭能力的影响及意义。方法取对数生长期大肠癌细胞SW480分为对照组(未经任何处理)、SDF-1组（加入100μg/L SDF-1）、SDF-1＋AMD3100混合组(向细胞中加入1 mg/L AMD3100，孵育2 h后加入100μg/L SDF-1)、AMD3100组（加入1 mg/L AMD3100）。免疫组化法检测SW480细胞中CXCR4蛋白表达情况；RT-PCR法检测SW480细胞中CXCR4 mRNA的表达情况，以及外源性SDF-1和AMD3100作用后CXCR4 mRNA表达水平的变化；MTT增殖实验、Transwell迁移及侵袭实验分别检测SDF-1以及AMD3100对SW480细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果 SW480细胞中CXCR4蛋白呈阳性表达（阳性率80%）。SW480细胞中有CXCR4 mRNA的表达，100μg/L SDF-1促使CXCR4 mRNA表达水平进一步上调，且能被1 mg/L AMD3100阻断。SDF-1组细胞增殖活性(0.847±0.039)高于对照组(0.624±0.011)和SDF-1＋AMD3100混合组(0.607±0.016)，AMD3100组(0.456±0.032)低于对照组和SDF-1＋AMD3100混合组(F=108.030，P＜0.05)。Transwell小室迁移及侵袭实验中SDF-1组穿膜细胞数(个：98.7±5.8、33.7±6.2)均多于对照组(21.0±2.2、6.1±2.3)、SDF-1＋AMD3100混合组(18.5±8.4、8.5±2.8)和AMD3100组(12.1±3.2、2.1±1.0)，后3组间比较差异无统计学意义。结论 SDF-1/CXCR4生物轴可促进大肠癌细胞SW480的增殖、迁移及侵袭。
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趋化因子受体CXCR4活化促进人胶质瘤干细胞迁移及其机制探讨
目的:研究趋化因子受体CXCR4活化对胶质瘤干细胞(glioma stem cells, GSCs)迁移能力的影响,并探索其下游相关信号通路.方法:采用逐渐添加神经干细胞培养液的方法从人胶质细胞瘤U87细胞株中获得GSCs,利用Transwell小室法评估CXCR4活化对GSCs迁移能力的影响,并进一步应用Western印迹法观察CXCR4下游信号通路的激活情况.结果:CXCR4的配体CXCL12以浓度依赖的方式促进GSCs迁移,同时伴有Akt磷酸化增加;CXCR4特异性拮抗剂AMD3100能够抑制此效应.PI3K/Akt通路抑制剂LY294002可通过抑制Akt磷酸化而抑制CXCL12诱导的GSCs迁移.结论:CXCR4活化后激活其下游的PI3K/Akt信号通路,进而促进GSCs迁移,这可能是GSCs高侵袭特性的机制之一.
