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重度子痫前期患者胎盘组织中缺氧适应相关基因的表达及其临床意义
目的 探讨胎盘组织中缺氧诱导因子脯氨酸羟化酶1(HPH1)和因子抑制缺氧诱导因子1(FIH-1)在重度子痫前期发病和疾病进展中的作用.方法 选择2006年7月至2007年7月在中国医科大学附属盛京医院妇产科住院选择剖宫产终止妊娠的重度子痫前期孕妇34例(重度子痫前期组)及正常晚期妊娠孕妇24例(对照组),采用RT-PCR和蛋白印迹法检测两组孕妇胎盘组织中的HPH1和FIH-1 mRNA及蛋白的表达,并与临床指标进行相关性分析.结果 (1)重度子痫前期组孕妇胎盘组织巾HPH1 mRNA及蛋白表达水平分别为0.40±0.04和59.5 ±3.4,显著低于对照组的0.84±0.12和71.6±1.7(P均<0.01);重度子痫前期组孕妇FIH-1 mRNA及蛋白表达水平分别为0.31±0.05和45.6±2.4,也显著低于对照组的0.43±0.04和54.9±2.1(P均<0.01).(2)重度子痫前期组孕妇胎盘组织中HPH1和FIH-1 mRNA及其蛋白表达水平与平均动脉压(MAP)均呈显著负相关关系,r均为-0.854(P均<0.01);与24 h尿蛋白定量均呈显著负相关关系,r均为-0.936(P均<0.01);与有无眼底动脉痉挛均呈显著负相关关系,r均为-0.854(P均<0.01).(3)两组58例孕妇胎盘组织中的HPH1 mRNA表达水平高于FIH-1 mRNA的表达,分别为0.58±0.27和0.39 ±0.10,两者呈正相关关系,,为0.686(P<0.01);HPH1蛋白表达水平高于FIH-1蛋白的表达水平,分别为64.5±6.7和49.4±5.2,两者也呈正相关关系,r为0.947(P<0.01).结论 HPHl和FIH-1的表达变化可能与蕈度子痫前期的发病及疾病进展相关.
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微RNA-21在肾缺血预处理中的保护作用及其机制
目的 探讨微RNA?21(miR?21)对脯氨酸羟化酶2(proline hydroxylase domain 2, PHD2)的调控作用,及其对肾脏晚期缺血预适应(ischemic preconditioning,IPC)小鼠的保护作用. 方法 建立肾脏晚期缺血预适应小鼠模型,分为两组:(1)缺血再灌注组(IR组):假手术后第4天双侧肾蒂夹闭35 min后恢复灌注;(2)缺血预适应组(IPC组):第1天双侧肾蒂夹闭15 min ,手术第4天处理同IR组.于术后第5天处死所有小鼠,留取血液及肾脏标本.HE染色观察肾组织病理变化;常规生化检测血肌酐(Scr)变化;实时荧光定量PCR法检测肾脏miR?21表达;Western印迹法检测肾组织PHD2和低氧诱导因子1α(HIF?1α)蛋白表达变化.体外给予人肾小管上皮细胞(HK?2)1% O2处理6 h ,采用Lipofectamine 2000法转染锁核酸(LNA)修饰的anti?miR?21寡核苷酸抑制miR?21表达,实时荧光定量PCR法检测细胞miR?21、PHD2以及HIF?1αmRNA表达;Western印迹法检测细胞PHD2与HIF?1α蛋白表达. 结果 体内实验结果发现,与IR组相比,IPC组小鼠血肌酐和肾组织病理损伤有明显改善(均P<0.01);与IR组相比,IPC组小鼠肾组织miR?21表达上调(P<0.01);PHD2蛋白表达下调(P<0.05),HIF?1α蛋白表达上调(P<0.05).体外HK?2细胞低氧模型实验结果提示,抑制细胞miR?21表达可致PHD2蛋白水平明显升高(P<0.05). 结论 miR?21对PHD2具有负向调控作用.晚期IPC可能通过诱导miR?21表达,减少PHD2表达,间接上调HIF?1α,对肾脏缺血再灌注损伤起到保护作用.
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脯氨酸羟化酶2对低氧环境下肾小管上皮细胞自噬现象的调控作用
目的 探讨沉默脯氨酸羟化酶2(PHD2)在人肾小管上皮细胞(HK-2)低氧损伤中对自噬的调控作用及相关机制.方法 采用氯化钴(200μmol/L)建立体外HK-2细胞的化学低氧模型,观察低氧培养后的不同时间点(0、6、12、24、36、48 h)电镜下的细胞超微结构改变,Alamar Blue法测定细胞存活率并评估细胞凋亡和自噬水平.同时转染HIF-1 siRNA、PHD2 siRNA,探讨PHD2在低氧情况下对自噬的调控机制.结果 PHD2在常氧下也有表达,随着低氧刺激的持续其蛋白水平逐渐上调,24 h时出现明显变化(P＜0.01),48 h表达为显著(P＜0.01).PHD2 siRNA转染后HK-2细胞在低氧培养24h时HIF-1的蛋白表达显著升高(P＜0.01),HIF-2α表达无明显改变.与阴性对照siRNA组相比,PHD2 siRNA转染组Bcl-xl蛋白水平上调(P＜0.01),Bax及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值下调(均P＜0.01),同时细胞活力上升[(37.04±3.25％比(28.32±2.41)％,P＜0.01].氯化钴处理前加入3-甲基腺嘌呤(3-MA,5mmol/L)后,HK-2细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值变化以及细胞活力与PHD2 siRNA转染结果相似,同时电镜下显示自噬体较单纯低氧组减少,细胞的超微结构也相对完整.同时沉默PHD2和HIF-1α则消除了由单独沉默PHD2带来的保护作用.结论 沉默PHD2可能通过稳定HK-2细胞的HIF-1 α活性、上调Bcl-xl蛋白水平,从而抑制细胞凋亡和自噬并减轻化学低氧诱导的细胞损伤.
