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微RNA-21在肾缺血预处理中的保护作用及其机制
目的 探讨微RNA?21(miR?21)对脯氨酸羟化酶2(proline hydroxylase domain 2, PHD2)的调控作用,及其对肾脏晚期缺血预适应(ischemic preconditioning,IPC)小鼠的保护作用. 方法 建立肾脏晚期缺血预适应小鼠模型,分为两组:(1)缺血再灌注组(IR组):假手术后第4天双侧肾蒂夹闭35 min后恢复灌注;(2)缺血预适应组(IPC组):第1天双侧肾蒂夹闭15 min ,手术第4天处理同IR组.于术后第5天处死所有小鼠,留取血液及肾脏标本.HE染色观察肾组织病理变化;常规生化检测血肌酐(Scr)变化;实时荧光定量PCR法检测肾脏miR?21表达;Western印迹法检测肾组织PHD2和低氧诱导因子1α(HIF?1α)蛋白表达变化.体外给予人肾小管上皮细胞(HK?2)1% O2处理6 h ,采用Lipofectamine 2000法转染锁核酸(LNA)修饰的anti?miR?21寡核苷酸抑制miR?21表达,实时荧光定量PCR法检测细胞miR?21、PHD2以及HIF?1αmRNA表达;Western印迹法检测细胞PHD2与HIF?1α蛋白表达. 结果 体内实验结果发现,与IR组相比,IPC组小鼠血肌酐和肾组织病理损伤有明显改善(均P<0.01);与IR组相比,IPC组小鼠肾组织miR?21表达上调(P<0.01);PHD2蛋白表达下调(P<0.05),HIF?1α蛋白表达上调(P<0.05).体外HK?2细胞低氧模型实验结果提示,抑制细胞miR?21表达可致PHD2蛋白水平明显升高(P<0.05). 结论 miR?21对PHD2具有负向调控作用.晚期IPC可能通过诱导miR?21表达,减少PHD2表达,间接上调HIF?1α,对肾脏缺血再灌注损伤起到保护作用.
