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PDGF-B基因表达在组织工程化皮肤移植后血管重建中的作用
目的构建含有血小板衍化生长因子-B(PDGF-B)基因的组织工程化皮肤,进行动物移植实验,研究PDGF-B基因表达在真皮血管重建中的作用.方法构建PDGF-B真核表达质粒,用脂质体LipofectAMINE介导转染成纤维细胞.分别构建3种不同类型的组织工程化皮肤:角质形成细胞+脱细胞猪真皮基质(A组),角质形成细胞+脱细胞猪真皮基质+成纤维细胞(B组),角质形成细胞+脱细胞猪真皮基质+PDGF-B基因转染的成纤维细胞(C组),分别移植于大鼠背部创面,观察术后2、4、6周真皮血管重建情况.结果术后2周C组真皮浅层内可见较多新生毛细血管长入,B组次之,A组毛细血管长入较少(P＜0.05);术后4周各组真皮浅层内毛细血管数逐渐增加,但C组毛细血管数仍明显高于B、A两组(P＜0.05);术后6周各组织工程化皮肤内毛细血管数差异无显著性意义.结论PDGF-B基因在组织工程化皮肤移植后早期真皮血管重建中发挥了重要的作用,为移植后皮片成活提供了保障.
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黑色素细胞与骨髓间充质干细胞复合构建组织工程化皮肤
目的 探讨构建含有黑色素细胞组织工程化皮肤的方法.方法 从人包皮组织中获取黑色素细胞,从人骨髓中获取骨髓间充质干细胞(BMSCs),以二者为种子细胞,按照1:10的比例混和培养,并与I型胶原膜复合体外构建组织工程化皮肤,对裸鼠创面进行修复.通过大体标本观察、4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)体内示踪标记、HE染色、免疫组织化学检测及透射电镜观察等方法,观察组织工程化皮肤修复裸鼠皮肤创面缺损及黑色素细胞的分布情况.结果 裸鼠创面皮肤生长良好,DAPI体内示踪标记、免疫组织化学检测S-100蛋白及透射电镜观察可以发现黑色素细胞以正常的组织结构形式分布于创面皮肤.结论 黑色素细胞与BMSCs通过适当的比例及体外条件培养,与I型胶原膜复合可以在体外构建出具有黑色素细胞的组织工程化皮肤.
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荷载角质细胞生长因子纳米微囊脱细胞真皮的制备、特性及其对表皮干细胞群生长的作用
目的:构建一种荷载有角质细胞生长因子且能控制释放的新型组织工程化皮肤.方法:实验于2006-03/12于中山大学附属第二医院干细胞研究中心及中山大学高分子研究所进行.①材料:角质细胞生长因子(CytolLAB公司),牛血清白蛋白(Amresco公司),聚乳酸-羟基乙酸共聚物(由中山大学高分子化学研究所合成,聚乳酸与聚羟基乙酸摩尔比为75:25,相对分子质量为50 000),脱细胞真皮(北京桀亚莱福生物技术有限公司).②方法:采用超声乳化-溶剂挥发及低温干燥方法,将角质细胞生长因子以牛血清白蛋白作联接包裹在聚乳酸-羟基乙酸共聚物内制成纳米微囊,根据公式计算微囊成球率、载药量及包封率;将微囊溶解于二氯甲烷中,进行体外释放实验检测不同时间牛血清白蛋白吸光度,作出牛血清白蛋白释放曲线;将角质细胞生长因子纳米微囊交联于脱细胞真皮表面,制成荷载角质细胞生长因子纳米微囊脱细胞真皮(KGF-ADM),在扫描电镜下观察微囊形态、分布及其与脱细胞真皮连接情况;采用Ⅰ型胶原酶复合胰蛋白酶消化的方法,从门诊健康患者无菌手术切除的包皮组织中获取表皮细胞单细胞悬液,经免疫荧光检测,证实其中含表皮干细胞,将表皮干细胞群分别接种于KGF-ADM及聚乳酸-羟基乙酸共聚物上,于恒温箱中培养3 d后,在扫描电镜下观察细胞形态、生长情况及其与材料连接情况.结果:①纳米微囊成球率为85%,载药量为17.3%,包封率为73.5%.②纳米微囊中牛血清白蛋白可以控制缓慢释放,其释放曲线显示初期释放速度较快(前5 d累计释放约40%),后进入缓慢释放期(30 d累计释放约75%).③扫描电镜检测显示纳米微囊形态规则,在KGF-ADM表面分布均匀,与KGF-ADM联接良好,部分分布于KGF-ADM深面;表皮干细胞群在KGF-ADM上生长活跃,细胞形态良好,部分形成克隆.结论:采用该方法可成功构建荷载角质细胞生长因子纳米微囊的新型组织工程化皮肤.
关键词： 角质细胞生长因子 脱细胞真皮 聚乳酸-羟基乙酸共聚物 纳米微囊 组织工程化皮肤 -
载荷角质细胞生长因子聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米缓释微球在组织工程皮肤构建中的应用
背景:聚乳酸-羟基乙酸共聚物具有良好的生物相容性和可降解性性.目的:制备载荷角质细胞生长因子聚乳酸-羟基乙酸共聚物控释载药系统用于组织工程皮肤.方法:采用乳化-溶剂挥发法、冷冻干燥法制备载有角质细胞生长因子的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米微球,并构建组织工程皮肤.扫描电镜、倒置显微镜、纳米粒度分析仪、紫外分光及ELISA法对微球评价其特性.结果与结论:纳米微球载药量为(14.05±0.56)%,包封率为(59.86±2.38)%,角质细胞生长因子活性保留率(78.26±5.63)%,体外释放30 d的累积释药率达75%以上,微球形态规则圆润.微球形态规整,在脱细胞真皮表面分布均匀,与其联接良好.毛囊干细胞群在荷载聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米微囊脱细胞真皮上生长活跃,细胞形态良好,并呈克隆团生长.说明实验用组织工程材料制备工艺合理,材料相容性好,可用于构建新型组织工程皮肤.
关键词： 角质细胞生长因子 聚乳酸-羟基乙酸共聚物 纳米微囊 组织工程化皮肤 构建 -
组织工程化皮肤在药物经皮吸收研究中的应用
目的:介绍组织工程化皮肤在药物经皮吸收研究中的应用.方法:查阅文献,简要综述组织工程化皮肤的特征及其在药物经皮吸收研究中的应用情况.结果:组织工程化皮肤已用于药物经皮吸收的研究.结论:组织工程化皮肤作为药物经皮吸收研究的模型值得进一步推广.
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组织工程化皮肤的新种子细胞-毛囊干细胞
以干细胞为种子细胞构建组织工程化皮肤成为当前研究的热点之一.皮肤干细胞主要有表皮干细胞和毛囊干细胞.毛囊干细胞在体内表现为慢周期性,在体外培养时具有高克隆形成能力,毛囊干细胞作为组织工程化皮肤的新种子细胞受到关注.
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组织工程化皮肤的研究现状与展望
通过查阅近年来国内外组织工程化皮肤相关的研究,综述组织工程化皮肤研究领域中的现状与进展.广泛查阅国内外有关组织工程化皮肤研究的文献,着重阐述表皮替代物、真皮替代物及表皮真皮复合皮片的研究现状和进展.组织工程是再生医学研究的热点,组织工程化皮肤是组织工程迄今为止成功的产品之一,现已广泛应用于临床.这篇文章从表皮替代物、真皮替代物及含有表皮和真皮复合皮片结构的皮肤替代物等方面对该领域的新研究现状和进展进行综述,并探讨了组织工程化皮肤的应用情况,分析了组织工程化皮肤目前存在的问题及未来的发展方向.组织工程化皮肤及其在患者身上的应用已经成为现实,随着组织工程技术的快速发展,我们可以获得与正常皮肤功能特征相似的理想的组织工程化皮肤.
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壳多糖基质网架复层组织工程皮肤的移植研究
目的探讨组织工程皮肤动物移植实验的效果. 方法应用以壳多糖为基质网架构建的组织工程化复层人工皮肤,对裸鼠大面积(直径20 mm)全层皮肤缺损模型进行移植修复.24只8周龄裸鼠分为组织工程皮肤移植(AS)组、壳多糖膜覆盖物(CH)组及对照组,术后进行大体观察,并在3、7、14和21天应用组织学、红外热像扫描分析等手段对修复组织进行动态监测. 结果 AS组在移植第3天,组织工程皮肤与自体皮肤能够很好地融合,有少量毛细血管长入移植物,皮肤移植物颜色与自体皮肤颜色接近;随着时间的延长,移植物中毛细血管的数量逐渐增多,表皮层清晰可见基底层、棘细胞层、颗粒层和角质层,角化征象加强,有角化物脱落;真皮层细胞数量增多,网架逐渐降解,分泌的细胞外基质成分增多;第14天,创面基本愈合,修复区皮肤颜色与正常皮肤颜色非常接近,瘢痕小,无需进行二次植皮.CH组至移植第14天,结痂未完全脱落,创面未愈合,颜色较AS组深;第21天创面愈合,遗留较大瘢痕,与正常皮肤区分明显,而对照组的结痂脱落,创面大而深,颜色深红. 结论以壳多糖为基质网架构建的组织工程化皮肤具有良好的组织相容性,可应用于皮肤缺损的移植修复.
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猪无细胞真皮基质对人皮肤成纤维细胞黏附及生长的影响
目的比较成纤维细胞(FB)在猪无细胞真皮基质(ADM)上的黏附及生长特性,探讨ADM作为组织工程化皮肤支架材料的可行性. 方法 FB 2 ml细胞浓度为2.5×105/ml,分别接种于经戊二醛交联、未经戊二醛交联、戊二醛交联不含基底膜和戊二醛交联并打孔形成网状的猪ADM 中孵育,相同数量FB接种于空白培养皿中作为对照,接种后1、3及5天行细胞计数,黏附有FB的ADM行HE染色观察. 结果 FB在经戊二醛交联、未经打孔完整的ADM上的黏附增殖优于未经戊二醛交联或戊二醛交联并打孔的ADM,是否含完整基底膜对成纤维细胞黏附增殖无明显影响. 结论采用经戊二醛交联、完整的ADM有利于FB的体外培养,ADM经一定的修饰后可能作为组织工程化皮肤的支架材料.
