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泛素水解酶22在肝癌中的表达及siRNA沉默泛素水解酶22基因对肝癌细胞生长的影响
目的 研究泛素水解酶22(ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase 22,USP22)基因在肝癌中的表达及沉默USP22基因对肝癌细胞的增殖活性、细胞凋亡和细胞周期的影响.方法 采用免疫组化检测58例肝细胞癌组织及相应癌旁组织中USP22蛋白的表达情况,采用RT-PCR和Western blot检测肝癌细胞中USP22的表达水平,并合成针对USP22基因的siRNA转染肝癌细胞;采用RTPCR检测和Western blot检测转染效率;MTF法测定细胞生长抑制率;流式细胞仪测定细胞凋亡率和细胞周期;免疫印迹检测CyclinD1、CDK4和CDK6蛋白表达水平.结果 发现USP22基因在肝癌组织及细胞中高表达;用针对USP22 siRNA干扰后,USP22表达水平明显降低;MTT法检测其细胞生长抑制率为42.24％,明显高于对照组(tsiUSP22组=22.47,P＜0.01);流式细胞仪检测其细胞凋亡率为33.08％ ±4.53％,明显高于对照组(tsiUSP22组=12.34,P＜0.01);流式细胞仪检测细胞周期,发现其处于G1期细胞的百分比为68.81％ ±2.71％,明显高于对照组(tsiUSP2组=33.91,P＜0.01);Western blot检测发现细胞周期蛋白CyclinD1、CDK4和CDK6在USP22 siRNA组中的表达水平明显低于对照组(tCyclinD1=10.85,tCDK4=10.51,tCDK6=10.59,P＜0.01). 结论 UPS22基因在肝癌组织及细胞中存在异常高表达,利用siRNA干扰UPS22表达,可抑制肝癌HepG3B细胞增殖活性,诱导其凋亡,并导致细胞周期被阻滞在G1期以内.
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泛素水解酶22siRNA对宫颈癌CD133+宫颈癌干细胞增殖和侵袭的影响
[目的]采用USP22 siRNA对宫颈癌CD133+CaSki宫颈癌干细胞进行基因治疗,观察其对USP22含量和对增殖侵袭能力的影响,并对其分子生物学机制进行初步探讨.[方法]流式分选获得CD133+ CaSki宫颈癌干细胞,分为USP22组、阴性对照(NC)组、空白对照组(MOCK)组.采用western blot法比较各组细胞USP22蛋白的含量,MTT法检测3组细胞的增殖能力,Transwell法检测3组细胞的侵袭能力,荧光素酶报告基因实验检测3组细胞Wnt/β-catenin信号通路的活性.[结果]采用流式细胞术分选CD133阳性细胞后CaSki细胞CD133阳性率为(96.87±5.31)％,显示流式分选宫颈癌干细胞成功(P＜0.05).Western blot检测结果显示,USP22组CD133+ CaSki细胞中USP22蛋白表达量明显降低.MTT结果显示USP22组细胞增殖能力明显减弱,差异具有统计学意义(P＜0.05).Transwell实验结果显示USP22组CD133+CaSki细胞侵袭能力明显受到抑制,差异具有统计学意义(P＜0.05).荧光素酶报告基因实验结果显示,USP22组Wnt/β-catenin信号通路的转录活性明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).[结论]USP22 siRNA有降低CD133+ CaSki宫颈癌干细胞内Wnt/β-catenin信号通路活性的作用,进而可以实现对宫颈癌干细胞增殖和侵袭功能的抑制,该治疗方法有望成为宫颈癌基因治疗的新手段.
