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不同修饰型hTERT启动子在多种肿瘤细胞中的转录活性研究
目的:对人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子进行不同修饰,然后对其在不同肿瘤细胞和原代培养的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGF)中的转录活性进行比较.方法:常规分子生物学方法克隆hTERT启动子区-378至+77之间序列和CWV增强子,采用SV40增强子、CWV增强子、SV40-CWV双增强子、Myc-Max反应元件(Myc-Max response elements,MMRE)、MMRE和SV40增强子联合对hTERT启动子分别进行修饰,分别构建其荧光素酶报告基因表达载体；采用脂质体Lipofectamine2000将重组质粒分别和pRL-CMV共转染不同肿瘤细胞和原代培养的牙龈成纤维细胞,双荧光素酶法检测hTERT启动子的转录活性.结果:酶切和测序鉴定hTERT启动子、CWV增强子克隆成功,以及荧光素酶表达载体构建成功；荧光素酶活性检测显示:野生型hTERT启动子不同肿瘤细胞中相对转录活性从 9.9％到24.4％有所不同,经不同修饰后活性大多有所提高,分别是野生型hTERT启动子的倍数:SV40增强子1.3至4.9倍；CWV增强子4.0至42.8倍；CWV和SV40联合增强子2.0至49.2倍；单一MMREO至5.5倍,MMRE和SV40增强子联合为1.2至8.4倍.野生型和修饰后的hTERT启动子在原代培养的牙龈成纤维细胞转录活性均较低.同一hTERT启动子在不同肿瘤细胞中转录活性不同.结论:不同修饰的hTERT启动子相对野生型hTERT转录活性大多有所提高,其中CMV增强子或SV40-CMV双增强子修饰的hTERT启动子提高幅度大,用于靶向性肿瘤基因治疗具有巨大潜力.
关键词： 人端粒酶逆转录酶启动子 靶向基因治疗 肿瘤 -
hTERT启动子调控的CD:UPRT/5-FC自杀基因对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用
目的:研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的胞嘧啶脱氨酶:尿嘧啶磷酸核糖转移酶/5-氟胞嘧啶(CD:UPRT/5-FC)融合自杀基因系统在体内对人胃癌SGC7901细胞的杀伤作用.方法:构建胃癌皮下移植瘤模型,随机分成3组处理.观察30天,测量肿瘤体积,计算抑瘤率.肿瘤组织做常规病理检查,免疫组化检测CD蛋白的表达.结果:成功构建胃癌皮下移植瘤模型.治疗30天后,B组(瘤内注射hTERT-CD:UPRT+腹腔注射PBS )和C组(单纯腹腔注射PBS)的肿瘤生长迅速,肿瘤体积分别为(2.72±0.35)cm3、(2.67±0.30)cm3,A组(瘤内注射hTERT-CD:UPRT+腹腔注射5-FC)的肿瘤生长受到明显抑制,第30天体积为(1.10±0.13)cm3,与前两组相比差异有统计学意义(P＜0.05),其抑瘤率为59.6%.裸鼠移植瘤病理切片镜检,A组可见大量肿瘤细胞排列稀疏,部分肿瘤细胞核固缩、核碎裂;B组和C组则见大量肿瘤细胞排列紧密,细胞形态和细胞核呈多形性,核大深染,核分裂像多见.免疫组化显示,A组和B组可见CD的表达,C组CD表达呈阴性.结论:hTERT启动子调控的CD:UPRT/5-FC融合自杀基因系统对裸鼠胃癌皮下移植瘤有显著的杀伤作用,为胃癌的基因治疗提供了一种可能的方法.
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人端粒酶逆转录酶启动子介导的靶向性肿瘤基因治疗的研究进展
端粒酶与肿瘤发生发展的关系是近年来肿瘤研究领域的热点之一.端粒的磨耗限制大多数体细胞的复制,肿瘤细胞主要通过转录上调端粒酶限制成分催化亚基端粒酶逆转录酶(hTERT)维持端粒长度.由于hTERT启动子区域已被克隆,其特点也已被鉴定,hTERT启动子介导的靶向性肿瘤基因治疗成为研究的热点.我们综述了hTERT启动子介导的靶向性肿瘤基因治疗新研究进展.
关键词： 人端粒酶逆转录酶启动子 转录因子 靶向性 基因治疗
