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基于协同刺激分子表达量建立慢性HBV感染患者T淋巴细胞免疫功能评价新体系的研究
目的 探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者外周血T淋巴细胞CD28、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)、程序性死亡分子-1(PD-1)和T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim-3)的表达及意义.方法 连续收集2012年10月至2013年6月在苏州大学附属第一医院住院的慢性HBV感染患者102例,其中慢性乙型肝炎(CHB) 42例,乙型肝炎肝硬化30例,肝癌30例.另选30名健康体检者作为对照组.采用流式细胞术和定量聚合酶链反应(PCR)技术测定所有研究对象外周血T淋巴细胞表面CD28、CTLA-4、PD-1和Tim-3的表达量,并采用单因素方差分析和LSD-t检验比较各组间的差异.采用Spearman秩相关分析外周血T淋巴细胞表面CD28、CTLA-4、PD-1和Tim-3的表达量与HBV DNA载量、乙型肝炎e抗原(HBeAg)和丙氨酸转氨酶(ALT)之间的相关性.结果 慢性HBV感染患者CD4+ CD28+、CD8+ CD28+和CD4+ CTLA-4+的表达均低于健康对照人群,其中肝癌组的CD4+ CD28+表达量低于CHB组(t=2.373,P＜0.05),肝硬化和肝癌组的CD8+CD28+表达量低于CHB组(t=4.324和4.088,P＜0.01).CHB组CD8+ PD-1+、CD4+ Tim-3+和CD8+ Tim-3+的表达量高于肝硬化、肝癌以及健康对照组(t=3.051,3.130,3.121,3.254和3.723,P＜0.01).相关性分析显示,CD8+T淋巴细胞PD-1表达量与ALT水平、HBV DNA载量呈正相关(r=0.516和0.582,P＜0.01);CD8+T淋巴细胞Tim-3的表达量与ALT水平、HBV DNA载量也呈正相关(r=0.578和0.556,P＜0.01).此外,CD8+T淋巴细胞PD-1与Tim-3的表达量也呈一定的正相关(r =0.506,P＜0.01).结论 HBV感染患者外周血T淋巴细胞表面分子异常表达与其免疫功能紊乱和疾病慢性化的发生和发展相关.
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小干扰RNA干扰T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3基因表达对支气管哮喘小鼠辅助性T淋巴细胞17细胞分化及致炎功能的影响
目的 探讨T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3基因(Tim-3基因)对辅助性T淋巴细胞17(Th17)细胞分化及支气管哮喘(哮喘)呼吸道炎症、呼吸道高反应性的影响.方法 用卵清蛋白致敏并激发建立哮喘小鼠模型,用Tim-3特异的小干扰RNA(shRNA)片段经鼻腔滴入以干扰哮喘小鼠Tim-3基因.采用有创肺阻抗法检测小鼠的呼吸道阻力;流式细胞分析技术检测Th17水平;酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中IL-17和TGF-β水平.结果 哮喘小鼠模型建立成功.使用Tim-3 shRNA干扰哮喘小鼠Tim-3,哮喘组呼吸道炎症减轻,呼吸道高反应下降.外周血单个核细胞中Th17细胞比例哮喘组[(6.43±1.01)％]较正常对照组[(1.75±0.02)％]明显升高,重组质粒干预后比例为[(2.36±0.28)％],明显降低,差异有统计学意义(F=40.05,P＜0.05);哮喘组IL-17水平[(118.8±16.5)ng/L]较正常对照组[(72.5±13.6)ng/L]明显升高,重组质粒干预后为[(73.6±12.5)ng/L],明显降低,差异有统计学意义(F =32.80,P＜0.05);TGF-β水平无明显变化.结论 沉默Tim-3基因表达可缓解呼吸道炎症及呼吸道高反应性,其机制可能与改变Th17细胞的分化有关.
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Tim-3对肝癌干细胞自我更新能力的调控以及对TGF-β1/smad4通路的影响
目的:探究T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim-3)在肝癌干细胞自我更新中的调控作用以及对转化生长因子-β1(TGF-β1)/smad4通路的影响.方法:体外培养肝癌细胞Huh7,获取肝癌干细胞,免疫印迹(WB)法检测肝癌干细胞标志物表达,包装si-Tim-3慢病毒载体感染肝癌干细胞分为空白组、si-NC组(添加阴性序列病毒)和si-Tim-3组,CKK-8法检测细胞增殖情况,光镜计数法检测细胞成球率,平板细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Tr-answell小室检测细胞侵袭能力,WB法检测细胞中TGF-β1、smad4蛋白表达.结果:与肝癌细胞相比,肝癌干细胞标志物白细胞分化抗原133(CD133)、CD90、上皮细胞黏附分子(EpCAM)蛋白表达显著升高(P<0.05).与空白组和si-NC组相比,si-Tim-3组细胞增殖抑制率、迁移抑制率和Smad4蛋白表达显著升高,成球率、克隆形成率、侵袭数量和Tim-3、TGF-β1蛋白表达显著降低(P<0.05).结论:抑制Tim-3表达后可抑制肝癌干细胞增殖、侵袭、迁移,其机制可能与下调TGF-β1、上调smad4蛋白有关.
