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胰岛素受体底物蛋白1及其丝氨酸磷酸化活性在胰岛素抵抗发生中的作用
目的 探讨胰岛素受体底物蛋白1 (IRS1)及其丝氨酸磷酸化在胰岛素抵抗(IR)发生中的作用. 方法 C57BL/6小鼠40只随机分为正常饮食组(NC组)和高脂饮食组(HF组),HC组喂养高脂饮食16周后建立IR模型.16周后处死,检测空腹血清胰岛素和口服糖耐量；RT-PCR检测小鼠骨骼肌TSC2和IRS1 mRNA表达.Western blot和免疫荧光染色检测骨骼肌TSC2、IRS1、IRS1ser307和IRS1Ser636/639蛋白表达. 结果 与NF组相比,HC组小鼠空腹血清胰岛素显著升高(P＜0.01),糖耐量显著受损,骨骼肌细胞TSC2 mRNA和蛋白均显著降低(P＜0.05),HF组pIRS1ser307和pIRS1Ser636/639蛋白表达显著增加(P＜0.01). 结论 高脂饮食可能通过抑制TSC2基因和蛋白表达,增强IRS1Ser307和IRS1Ser636/639的磷酸化水平,阻碍胰岛素信号传导,诱发IR.
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清心开窍方对Aβ25-35诱导原代海马神经元损伤IGF-1R、IRS-1及Aβ mRNA表达的影响
目的:研究清心开窍方对Aβ25-35诱导原代海马神经元细胞损伤胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R)、胰岛素受体底物蛋白1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)及β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)基因表达的影响,探讨清心开窍方对神经元细胞的保护作用及其机制.方法:制备SD乳鼠原代海马神经元细胞,分为6组:正常对照组、模型组、尼莫地平组(1 × 107 mol·L-1)、清心开窍方低、中、高剂量组(6.25、12.5、25 mg/mL).支持培养至第7天,各治疗组分别给予相应药物预处理24 h后,模型组及各治疗组加入老化处理的Aβ25-35(终浓度为10 μmol·L-1)共同作用24 h,建立AD细胞模型.正常对照组给予相等体积的培养液继续孵育24 h.采用CCK-8法检测各组的细胞活力,RT-PCR法检测各组IGF-1R、IRS-1和AβmRNA的表达水平.结果:模型组与正常对照组比较细胞活性明显降低(P＜0.01),而清心开窍方能有效改善细胞活性;RT-PCR法结果显示模型组IGF-1R mRNA明显降低(P＜0.01),IRS-1和Aβ mRNA表达均明显增加(P＜0.01),而不同浓度的清心开窍方处理后均能提高IGF-1R mRNA的表达(P＜0.01或P＜0.05),减少IRS-1和Aβ mRNA表达(P＜0.01或P＜0.05).结论:清心开窍方能减轻β-淀粉样蛋白对神经元细胞的毒性作用,提高细胞存活率,保护海马神经元细胞.
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脂连素对大鼠创伤后胰岛素抵抗的作用
目的 观察创伤后胰岛素抵抗现象,探讨脂连素对手术创伤导致的胰岛素抵抗的作用和机制.方法 60只SD大鼠随机分为脂连素组(n=20)、创伤组(n=20)以及对照组(n=20).建立大鼠创伤模型,脂连索组运用脂连素进行预处理(1 mg/kg腹腔内注射),测定大鼠的血糖及血清胰岛素浓度,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素分泌指数(HOMA-β)；检测骨骼肌胰岛素受体底物蛋白-1( IRS-1)、蛋白激酶B(PKB/Akt)的含量及其磷酸化状态.结果 创伤组与对照组比较血糖浓度明显升高(P＜0.05),血清胰岛素浓度先短暂下降然后逐渐升高(P＜0.05).HOMA-IR明显高于对照组(P＜0.05),HOMA-β则低于对照组(P＜0.05).脂连素组大鼠血糖浓度明显下降(P＜0.05),血清胰岛素浓度无明显改变(P＞0.05).HOMA-IR明显下降(P＜0.05),HOMA-β明显上升(P＜0.05).创伤组与对照组、脂连素组与创伤组大鼠骨骼肌中总的IRS-1及PKB/Akt蛋白含量无明显差异,但创伤组较对照组大鼠骨骼肌的IRS-1酪氨酸(Tyr)位点的磷酸化水平下降了31％[ (88.54±33.48)比(128.60±33.19),F=0.108,P＜0.01],丝氨酸(Ser)位点磷酸化水平增加了64％[(154.31±36.94)比(94.20±27.88),F=0.602,P＜0.01],PKB/Akt的磷酸化水平下降了46％[ (46.58±2.48)比(86.32±3.31),F=0.153,P＜0.01].脂连素组大鼠的骨骼肌IRS-1 Tyr位点的磷酸化水平较创伤组上升了23％[(109.05±30.77)比(88.54±33.48),F=0.012,P＜0.01],而Ser位点磷酸化水平下降了30％ [(118.65±33.49)比(154.31±36.94),F=0.272,P＜0.01],PKB/Akt的磷酸化水平上升了56％[ (72.73±2.95)比(46.58±2.48),F=0.473,P＜0.01].结论 大鼠创伤后存在胰岛素抵抗现象,其机制与胰岛素受体后信号转导通路受阻有关.脂连素能缓解创伤后胰岛素抵抗途径的发生和发展,从而改善创伤后胰岛索抵抗产生的高血糖.
关键词： 脂连素 创伤 胰岛素抵抗 胰岛素受体底物蛋白1 蛋白激酶B
