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人组织激肽释放酶基因文献资料
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导入人组织激肽释放酶基因治疗肾血管性高血压实验研究
目的构建重组人组织激肽释放酶基因真核表达载体并研究其骨骼肌注射对高血压大鼠的降压效应.方法以pBluescripeⅡKSKLK(+)为模板用PCR扩增人组织激肽释放酶基因,将其定向克隆至pcDNA3载体上,形成重组质粒pcDNA3/KLK,并经酶切和测序鉴定.给"两肾一夹"肾性高血压大鼠的股四头肌注入1000 μg pcDNA3/KLK,,随后给予100 V、1 Hz、40 ms电刺激6次,并用RT-PCR、Western杂交检测人KLKcDNA在体内的表达.尾套法测血压每周2次.结果一次肌肉注射人组织激肽释放酶cDNA可明显延缓"两肾一夹"肾性高血压大鼠的血压升高;能降低血压达8～21 mm Hg.局部肌肉组织的信使核糖核酸(mRNA)和KLK表达阳性.结论成功构建了pcD-NA3/KLK真核表达载体,肌肉注射人组织激肽释放酶基因可引起"两肾一夹"肾性高血压大鼠血压的持续性下降,显示了人KLK基因对高血压患者降压治疗的可能性.
关键词： 人组织激肽释放酶基因 肾血管性高血压 基因治疗 -
人组织激肽释放酶基因真核表达载体的构建与鉴定
目的构建并鉴定人组织激肽释放酶基(h-TKK)基因真核表达质粒.方法设计含pnI和BamHⅠ酶切位点的人组织激肽释放酶基因引物,采用PCR法从原核pBluescripe Ⅱ KSKK(+)中扩增KKcDNA片段,亚克隆至pAdtrack-CMV真核表达载体,转化感受态大肠杆菌DH10B,酶切鉴定阳性重组子,并进行序列测定.结果经PCR能扩增出738 bp 的片段,与预期片段大小相符,构建的重组体经酶切鉴定能切出插入片段,测序结果与预期序列完全一致.结论成功构建了人组织激肽释放酶基因真核表达重组体pAdtrack-CMV KK.
关键词： 人组织激肽释放酶基因 真核表达载体 基因扩增 序列分析
