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不同处理条件下人脱细胞脐动脉组织结构和生物力学性质的对比研究
目的:研究不同处理方法对人脱细胞脐动脉的组织结构影响,并比较其生物力学性质,为小口径组织工程人工血管支架的选择提供依据.方法:搏动条件下采用酶消化法脱去人脐动脉中的细胞成分(n=10),将每根脱细胞脐动脉平分为3段,随机均分为3组,A组经0.9％氯化钠液、B组经75％乙醇、C组经0.5％戊二醛处理.对处理后的脱细胞脐动脉进行HE染色、弹力纤维染色、生物力学检测(抗张力测试和抗爆破压测试),并进行比较.结果:脱细胞脐动脉经3种处理后B组及C组的塑形性较A组好；力学测试结果显示抗张力强度C组大(4.63±1.06)N,B组次之(2.20±0.43)N,A组小(0.93±0.33)N(P ＜0.05)；抗爆破压强度B组(257±23)mmHg(1 mmHg =0.133 kPa),C组(261±23) mmHg无差异,均大于A组(143±19)mmHg(P ＜0.05)；从位移-负荷曲线分析,C组的斜率大,B组次之,A组小；HE染色结果显示B组、C组脱细胞脐动脉的弹力纤维板形态能够很好地保存下来,而A组的弹力纤维板不明显；3组血管经抗张力测试,纵向拉伸或抗爆破压测试后,再采用弹力纤维染色进行形态学观察,A组的弹力纤维断裂比较明显,B组弹力纤维断裂较A组少,但较C组的断裂多.结论:使用75％乙醇或0.5％戊二醛处理后的脱细胞脐动脉塑性好,组织结构的形态佳、生物力学性质均明显较0.9％氯化钠液处理组好,而75％乙醇处理后的脱细胞脐动脉,在其柔韧性方面较0.5％戊二醛处理后更接近于生理状态,因此75％乙醇处理后的脱细胞脐动脉可能是较理想的血管支架材料.
关键词： 人脐动脉 生物力学性质 组织结构 小口径组织工程人工血管 -
应用植块法培养人脐动脉平滑肌细胞
目的应用植块法培养人脐动脉平滑肌细胞.方法取人脐动脉,去除内外膜,剪成1mm3左右的小块等距均匀种植,用含20%小牛血清BMEM液培养.结果4 d时可见组织边缘处有细胞游出,2～3周后细胞融合生长,呈"峰谷"状生长,经抗免疫组化、电镜鉴定为平滑肌细胞.结论应用植块法培养人脐动脉平滑肌原代细胞简单易行、纯度高,具有实际意义.
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人脐动脉的抗压力性及其用于兔血管移植的研究
目的 探讨人脐动脉的耐压性能,观察辐照氟银脐动脉移植至中国白兔颈动脉后的内膜增生及ki-67的表达.方法 液压扩张法检测脐动脉的耐压性能.30只中国白兔的左、右侧颈动脉同时分别植入辐照氟银脐动脉(实验组)和自体颈动脉(对照组),术后2、6周观察血管通畅情况,分别取材作组织形态学观察和免疫组织化学检测,观察血管内膜厚度及血管平滑肌细胞中ki-67的阳性表达.结果 人脐动脉具有良好的耐压性能.移植术后2、6周2组兔移植血管内膜厚度比较差异无统计学意义(P＞0.05).实验组兔血管平滑肌细胞中ki-67的表达较对照组高,但2组术后2、6周比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 人脐动脉从耐压性能上具备作为冠状动脉搭桥血管材料的基本条件.辐照氟银脐动脉的内膜增生与自体动脉无明显差异.
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一种高效分离和培养人脐动脉内皮细胞方法的建立
目的 探索和建立一种高效的人脐动脉内皮细胞分离和培养方法.方法 用PBS灌注清洗脐动脉后,以0.1 g/L1型胶原酶消化脐动脉内膜,收集、离心消化液,重悬细胞在特定培养基中培养.观察其形态特点,同时用CD31免疫荧光染色和内皮细胞管状结构形成实验对所得细胞进行鉴定.结果 倒置相差显微镜下观察所获得的细胞为单层生长,呈现铺路石样形态,并且大量表达内皮细胞特异性膜蛋白CD31,同时能够形成明显的管状结构.结论 本研究建立了操作简单、快速、高效分离人脐动脉内皮细胞的方法,所分离得到的内皮细胞纯度高、成活率高.
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脐动脉平滑肌细胞体外培养方法的改进
目的:建立并优化的人脐动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)的体外培养方法.方法:人脐动脉VSMCs的体外原代培养应用优化的组织块贴壁法进行.在分别应用传统细胞培养法和优化后细胞培养法贴壁培养提取的原代细胞10 d后,计数6孔板每孔细胞数目,并做统计比较分析相同时间内原代细胞的数量.以抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体和抗CD31抗体进行免疫荧光染色和倒置相差显微镜观察鉴定培养的细胞.结果:与传统细胞培养法相比,在相同的时间周期内优化实验方法后培养的原代细胞数量较传统多,我们可以在较短时间内得到实验所需的细胞量,因此优化后可缩短细胞的培养周期.原代和传代培养的脐动脉VSMCs生长良好,细胞经冻存、复苏后状态依然良好.光镜下细胞呈典型的“峰-谷”样生长,细胞多为长梭形,具有VSMCs的特征,且传代培养至第7代,细胞生长特性不变.经抗α-SMA、CD31抗体进行免疫荧光染色鉴定证实为VSMCs.结论:优化的组织块贴壁法可缩短原代人脐动脉VSMCs的培养周期,且细胞的生物学特性较稳定,为与平滑肌相关的疾病进展及心血管生长发育的研究奠定了实验基础.
