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构建和鉴定神经生长因子-β腺相关病毒穿梭质粒
目的 构建能够表达神经生长因子-β重组腺相关病毒穿梭质粒,为进一步包装腺相关病毒奠定基础.方法 利用高保真酶分别扩增pAAV-MCS的结构元件和pGenesil-1.1的功能元件,连人T-easy载体,限制性核酸内切酶酶切并回收目的片段,T4酶连接,得到含U6和CMV双启动子的重组腺相关病毒穿梭质粒pAAV-U6/CMV-EGFP;培养人MIApaca-2细胞,提取总RNA,进行RT-PCR得到人ngf-β基因,插入T-easy载体,得到T-easy-ngf-β；将ngf-β插入pAAV-U6/CMV-EGFP,构建ngf-β重组腺相关病毒穿梭质粒.结果酶切pAAV-U6/CMV-EGFP可见4250 bp、800 bp条带,质粒转染293细胞后可见绿色荧光蛋白表达；质粒T-easy-ngf-β酶切可见3 kb、736 bp条带,测序显示基因序列正确；酶切pAAV-U6/CMV-ngf-β可见4300 bp、736 bp条带；质粒pAAV-U6/CMV-ngf-β测序显示载体中的基因序列正确.结论 成功构建ngf-β重组腺相关病毒穿梭质粒,包装表达神经生长因子的腺相关病毒,为进一步深入研究脊髓损伤的修复提供了实验基础.
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NGF-β、IL-1β和S100β水平与首发精神分裂症患者认知功能障碍和PANSS评分的相关性研究
精神分裂症是一种遗传性精神障碍,其临床症状主要有阳性症状、阴性症状以及认知功能障碍,其中认知功能障碍严重损害患者的社会功能[1].对精神分裂症患者的治疗主要以药物治疗为主,但是仅对于患者的阳性症状具有一定的效果,阴性症状和认知功能并没有显著改善[2].本研究分析神经生长因子(NGF-β)、白介素1β(IL-1β)、钙结合蛋白(S100β)三种血清蛋白因子与以阳性症状和阴性症状为主的首发精神分裂症患者认知功能障碍和阳性与阴性量表(Positive and negative symptoms scale,PANSS)评分之间的相关性,具体研究报道如下.
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上调神经生长因子-β对人胆管癌细胞QBC939、生物学特性的影响
目的 探讨神经生长因子-β上调对人胆管癌细胞QBC939增殖、凋亡、细胞周期及克隆形成能力等生物学特性的影响.方法 构建稳定转染pEGFP-N1-NGF的QBC939细胞,上调神经生长因子-β的表达(高表达组),转染pEGFP-N1-NC组的QBC939细胞作为对照组.以Western blot方法检测细胞转染效果,细胞增殖实验(CCK-8实验)检测细胞增殖能力,单克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡.结果 在450nm波长下,24小时测得对照组QBC939细胞的吸光度值为0.409±0.014,高表达组细胞的吸光度值为0.691±0.029; 48小时测得对照组QBC939细胞的吸光度值为1.612±0.044,高表达组细胞的吸光度值为2.033±0.005,其差异均具有统计学意义(P＜0.05)；200倍显微镜下观察,对照组直径大于500 um的单细胞克隆数比例为10％,高表达组直径大于500 um的单细胞克隆数比例为24％,统计学差异显著(P＜0.01);对照组S期细胞数所占比例为( 15.643±0.693)％,高表达组S期细胞数所占比例为(40.193±1.671)％,统计学差异显著(P＜0.01)；对照组细胞早期凋亡率为(15.76±0.97)％,高表达组细胞早期凋亡率为(8.82±0.93)％,具有统计学差异(P＜0.05).结论 上调神经生长因子-β能够增强QBC939细胞的增殖与克隆形成能力,能够促进细胞进入S期,抑制细胞凋亡.
