缺氧/复氧后鼠脑星形胶质细胞基因表达谱的初步分析

目的该实验利用基因芯片技术研究缺氧/复氧处理后鼠脑星形胶质细胞基因表达谱的变化,以深入认识星形胶质细胞在缺氧/复氧处理后基因表达变化规律,为进一步全面认识神经胶质细胞在缺氧和缺血再灌注等情况下基因变化规律以及神经胶质细胞与神经元在损伤条件下相互依存关系提供实验依据和理论基础.方法取人鼠脑星形胶质细胞作传代培养,传至第四代分组作缺氧/复氧处理;用TRIzol试剂经过多个步骤提取制备好的星形胶质细胞样本总RNA;利用基因芯片技术获取缺氧/复氧处理后鼠脑星形胶质细胞的基因表达谱;利用Gene Ontology Consortium分析系统、OeneCards数据库和Pubmed检索系统对基因表达谱进行初步分析.结果①基因表达谱:在基因芯片测定了4 096个点,共有差异表达基因187个,其中,差异表达基因187个,己知差异表达基因46个,未知差异表达基因141个(EST片段).②已知差异表达基因:在46个已知差异表达基因中,表达下调的基因有41个,表达上调的基因有5个,未见报道的与缺氧/复氧处理相关基因23个,已报道的有18个.③已知差异表达基因功能聚类:共10类,其中代谢23个、信号传导9个、细胞生长3个、结构蛋白2个、免疫应答4个、运输1个、细胞周期1个、细胞增殖1个、凋亡1个、分子伴.侣1个.结论该实验获得鼠脑星形胶质细胞缺氧/复氧处理后的基因表达谱.首次发现28个与缺氧/复氧相关的未见报道基因.初步明确已知差异表达基因在缺氧/复氧处理后的基本变化规律.

高热对星形胶质细胞GFAP表达的影响

目的研究高热对大脑星形胶质细胞中胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达的影响及后果.方法分离培养脑星形胶质细胞;42 ℃分别作用细胞1、2、4 h后,进行免疫学染色,观察GFAP表达的变化;采用改良Lowry法测定星形胶质细胞条件培养液中总蛋白含量.结果在高温条件下,脑星形胶质细胞反应性增生.42 ℃作用4 h后,GFAP表达显著减少,细胞条件培养液中总蛋白含量减少26 μg/ml(由383 μg/ml降低到357 μg/ml).结论高热条件可以下调脑星形胶质细胞GFAP的表达,影响星形胶质细胞生物学功能,在中枢损伤的发生发展过程中发挥作用.

缺氧处理后鼠脑星形胶质细胞基因表达谱的初步分析

目的:本实验利用基因芯片技术研究缺氧处理后鼠脑星形胶质细胞基因表达谱的变化,以深入认识星形胶质细胞在缺氧处理后基因表达变化规律,为进一步全面认识神经胶质细胞在缺血情况下基因变化规律以及神经胶质细胞与神经元在损伤条件下相互依存关系提供实验依据和理论基础.方法:用TRIzol试剂经过多个步骤提取各组制备好的星形胶质细胞样本总RNA;利用基因芯片技术获取缺氧处理后鼠脑星形胶质细胞的基因表达谱;利用Gene Ontology Consortium分析系统、Gene Cards数据库和Pubmed检索系统对基因表达谱进行初步分析.结果:基因表达谱:在基因芯片上测定了4096个点,共有差异表达基因153个,其中,已知差异表达基因45个,未知差异表达基因108个(EST片段);己知差异表达基因:在45个已知差异表达基因中,表达下调的基因有22个,表达上调的基因有23个,未见报道的与缺氧处理相关基因28个,已报道的有17个;已知差异表达基因功能聚类:共8类.结论:本实验获得鼠脑星形胶质细胞缺氧处理后的基因表达谱;首次发现28个与缺氧相关的未见报道基因;初步明确已知差异表达基因在缺氧处理后的基本变化规律.

划痕损伤对大鼠脑皮层星形胶质细胞NF-κB表达及继发性死亡的影响

目的 观察划痕损伤对大鼠脑皮层星形胶质细胞NF-κB表达及自噬、凋亡和坏死的影响.方法 建立SD大鼠脑皮层星形胶质细胞划痕损伤模型,用NF-κB抑制剂吡咯醛二硫氨基甲酸(PDTC)干预48h,分别用流式细胞术、免疫荧光法、Western blot检测不同时间点(1、6、12、24、48 h)星形胶质细胞凋亡、坏死及NF-κB p65蛋白、自噬蛋白LC3Ⅱ表达.结果 星形胶质细胞NF-κB蛋白表达在划痕损伤后1h开始增多,24 h达高峰,凋亡、坏死及LC3Ⅱ表达均随时间推移有不同程度升高(P＜0.01).PDTC处理后,上述变化均有不同程度的抑制(P＜0.01).结论 划痕损伤后可激活脑星形胶质细胞NF-κβ表达、自噬、凋亡和坏死.

缺氧对大鼠脑星形胶质细胞释放NO、PGI2、TXA2、ET-1的影响

大鼠脑星形胶质细胞液压冲击损伤后蛋白质差异表达研究

中枢神经系统(central nervous system,CNS)中,星形胶质细胞(astrocyte,As)是数目多的一类细胞群体,对维持脑内微环境的稳定及神经元功能具有重要作用[1-3].有研究表明,CNS创伤后,星形胶质细胞比神经元更易产生应激反应,超微结构变化也更明显[3,4].