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白介素-1受体相关蛋白酶-4基因多态性与脓毒症的易感性
目的 探讨IRAK4(interleukin-1 receptor-associated kinase 4,IRAK4)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与中国汉族人群严重脓毒症易感性和预后的相关性.方法 收集2006年2月至2009年12月复旦大学附属中山医院急诊科收治的192例严重脓毒症患者进行研究.排除既往患有自身免疫性疾病、正在应用免疫抑制剂、AIDS和肿瘤患者.另外选择年龄和性别匹配的192名健康个体作为对照.本研究获得复旦大学附属中山医院伦理委员会同意.严重脓毒症患者根据30 d是否存活分为存活组和死亡组,存活组124例,死亡组68例.利用Hapmap中国人群数据库选择标签SNPs(tagSNPs),利用Primer 3软件设计引物；采用DNA抽提试剂盒提取外周血DNA,PCR-直接测序法进行SNPs分型.基因型频率和等位基因频率在各组之间的比较采用x2检验.结果 IRAK4基因7个tagSNPs等位基因频率分布在研究样本中均符合Hardy-Weinberg平衡.研究发现位于IRAK4基因外显子的SNP rs4251545(G/A)等位基因和基因型频率在严重脓毒症组和健康对照组之间差异具有统计学意义(等位基因P=0.015,基因型P=0.035),携带等位基因A的个体比携带等位基因G的个体更易患严重脓毒症(OR=1.69,95％ CI:1.10～2.58);7个tagSNPs的等位基因和基因型频率在死亡组和存活组中差异无统计学意义.结论IRAK4基因变异与中国汉族人群严重脓毒症易感性有关.
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白介素1受体相关激酶4重组过表达质粒pcDNA3.1-IRAK4的构建及转染
目的 构建重组过表达质粒pcDNA3.1-IRAK4并检验其在H9c2细胞中的表达.方法 在全球科学家质粒共享非盈利组织Addgene申请到pDONR223-IRAK4质粒菌种,摇菌提取质粒后测序.设计引物将目的片段扩增并跑胶回收.将目的片段PCR扩增产物和空质粒pcDNA3.1采用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切,构建重组表达质粒.将重组质粒使用两种转染试剂转染人H9c2细胞中,并借助Western blot法检测IRAK4蛋白在H9c2细胞中的表达.结果 重组过表达质粒经菌落PCR、序列测定证实,扩增基因片段IRAK4与基因数据库中序列一致,并且含有终止密码子.转染人H9c2细胞中能够过表达,表明IRAK4重组过表达质粒构建成功.结论 成功构建IRAK4基因过表达重组质粒,获得外源性IRAK4转染的H9c2细胞.
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信号分子IRAK1/4在anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF中的作用探讨
目的:探讨IRAK1和IRAK4在anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用.方法:利用荧光定量PCR(Real-time PCR)、TF活性试剂盒分别检测THP-1细胞表达TF mRNA及TF活性;Western blot检测anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达IRAK1、磷酸化-IRAK1(p-IRAK1)、IRAK4情况;观察IRAK1/4抑制物是否干预anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1表达TF.结果:Anti-β2GPI/β2GPI复合物(100 μg/ml)诱导THP-1细胞表达TF显著增加(P<0.05 vs control);Anti-β2GPI/β2GPI复合物(100 μg/ml)刺激THP-1细胞表达IRAK1、p-IRAK1、IRAK4(蛋白)显著升高(P<0.05 vs control);IRAK1/4抑制物(50 μmol/L)能够阻断anti-β2GPI/β2GPI复合物(100 μg/ml)诱导THP-1表达TF及IRAK1磷酸化的效应.结论:anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,信号分子IRAK1/4被激活进而发挥重要作用.
关键词： 抗磷脂综合征 anti-β2GPI/β2GPI IRAK1 IRAK4 组织因子 -
毒热平注射液对病毒感染巨噬细胞IRAK4表达的影响
目的 研究毒热平注射液对流感病毒感染的小鼠腹腔巨噬细胞株Ana-1 表达IRAK4(IL-1 receptor associated kinase 4, IRAK4)的影响.方法 用100 TCID50流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠腹腔巨噬细胞株Ana-1后换用10 μg/ml浓度含药维持液继续培养,于12 h弃细胞上清液并收集细胞,提取细胞RNA和核蛋白,进行实时定量PCR反应(RT-PCR)和Western-blot实验,分别测定毒热平注射液对病毒感染前后巨噬细胞IRAK4 mRNA和NF-κB p65蛋白表达水平的影响.结果 毒热平注射液可下调病毒感染巨噬细胞IRAK4 mRNA和NF-κB p65蛋白的表达水平.结论 毒热平注射液的抗病毒作用可能与下调依赖MyD88的信号传导通路中IRAK4的表达有关.
