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供体脾细胞输注诱导小鼠移植耐受及其机理的研究
目的以持续供体脾细胞输注的方法建立异基因嵌合体动物模型，并探讨移植耐受形成的机制。方法 BALB/c（H-2d）小鼠经尾静脉注入C57BL/6（H-2b，B6）脾细胞5×107，2?d后，给BALB/c小鼠腹腔注射环磷酰胺（Cy）150mg/kg体重，注射Cy后1?d，开始给BALB/c小鼠静脉注射B6源小鼠的脾细胞1次/d，107/次，共持续5?d。之后，通过皮肤移植、混合淋巴细胞反应(MLR)确定移植耐受的状态，并通过过继转移实验、嵌合体检查及耐受和排斥小鼠脾细胞中细胞因子mRNA的表达情况，进一步探讨耐受形成的机制。结果耐受小鼠获得供体特异性移植耐受；耐受可以被过继转移；耐受小鼠体内嵌合程度与耐受程度有一定相关性；IL-2、IFN-γ等TH1型细胞因子在耐受小鼠脾细胞中较对照小鼠明显降低，IL-10在耐受小鼠中的表达明显升高，但IL-4在耐受小鼠中的表达与排斥小鼠差异无显著性。结论供体脾细胞＋Cy＋持续供体脾细胞输注可以诱导供体特异性耐受；多种耐受机理，包括嵌合体形成、抑制细胞以及TH1/TH2型细胞的偏移都对耐受形成起作用。
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地塞米松对内毒素肺损伤大鼠Th1/Th2细胞偏移的影响
观察地塞米松(DEX)对Th1/Th2偏移的影响,从Th1/Th2偏移的角度探讨DEX对内毒素肺损伤的治疗作用.静脉注射脂多糖制作大鼠内毒察肺损伤模型.分离、提纯外周血与BALF中T淋巴细胞,抗大鼠CD4-FITC单克隆抗体标记,通过流式细胞仪分选后,应用免疫组织化学技术动态观察Th1、Th2细胞的变化.结果LPS致伤后,外周血与BALF中IFN-γ阳性细胞(Th1细胞)与IL-4阳性细胞(Th2细胞)数目均减少,Th1细胞在相应时相点CD4+T淋巴细胞总数的百分比在一过性增高后进行性减少,CD4+T细胞中Th1细胞构成比呈先增加后减少趋势,而Th2细胞构成比则持续增高,提示LPS使CD4+T细胞构成比由Th1向Th2偏移.DEX组IFN-γ阳性细胞、IL-4阳性细胞数目均减少,Th1/Th2比例趋于接近正常.Th1/Th2偏移可能部分参与内毒素肺损伤的发生,DEX通过调节炎症反应,使Th1/Th2比例趋于正常,发挥部分治疗作用.
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雌激素对同种抗原刺激T细胞反应的影响
目的研究雌激素(E2)对同种抗原刺激T细胞反应的影响,及其与Th1/Th2细胞因子间的关系.方法利用单向混合淋巴细胞培养体系,以C57BL/6 小鼠脾细胞作为反应细胞,分别用经丝裂霉素C处理的Balb/C小鼠脾细胞(实验组Ⅰ)和ConA(实验组Ⅱ)作为刺激原活化T细胞,未加刺激原为空白组,同时加入妊娠水平的E2进行共培养,未加E2为对照组.72 h后,采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测各组细胞培养上清液中Th1型细胞因子(TNF-α)及Th2型细胞因子(IL-10)的表达水平.结果与空白组(1.49pg/mL)相比,实验组Ⅰ与实验组Ⅱ分泌IL-10均增高(27.69pg/mL和26.28pg/mL,P＜0.01),实验组Ⅱ分泌TNF-α浓度为28.82pg/mL,与空白组相比,TNF-α水平下降(P＜0.05),提示T细胞反应向Th2偏移;在给予E2共培养后,IL-10水平均进一步显著增高(37.02pg/mL和39.58pg/mL P＜0.01);而实验组Ⅰ和实验组Ⅱ中TNF-α浓度与对照组相比均进一步降低(23.55pg/mL和21.86pg/mL,P＜0.05);在无刺激原存在条件下,E2亦可使T细胞分泌TNF-α水平明显降低(P＜0.01),而且实验组Ⅰ和实验组Ⅱ相比,E2使T细胞分泌TNF-α水平的降低及IL-10水平的增高无显著差异(P＞0.05).结论雌激素体外刺激可使同种抗原活化的T细胞分泌IL-10增多,同时下调TNF-α,即导致T细胞反应向Th2偏移.而且雌激素对TNF-α的下调作用与T细胞活化无明显相关.
