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MUC1/Y基因修饰的树突状细胞体外抗卵巢癌效应的研究
目的研究人MUC1/Y基因转染人外周血树突状细胞(DC)后在体外诱导的特异性抗MUC1/Y+卵巢癌效应. 方法通过人外周血单核细胞诱导DC,采用脂质体法将已构建好的含人MUC1/Y全长cDNA的真核表达载体pEGFP-N1/MUC1/Y转染到DC中,荧光显微镜下观察其表达的蛋白定位;与自体T细胞共培养,观察其致敏的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对MUC1/Y+的卵巢癌细胞A2780的杀伤活性,并与转染空载体的DC诱导的CTL进行比较. 结果 pEGFP-N1/MUC1/Y转染DC后,其绿色荧光蛋白主要表达于DC细胞膜上,可诱导出对卵巢癌细胞系A2780特异性的细胞毒性T细胞. 结论 MUC1/Y基因修饰的DC可诱导特异的抗MUC1/Y+卵巢癌效应.
关键词： 人树突状细胞 MUC1/Y 基因转染 卵巢癌 细胞毒性T淋巴细胞(CTL) -
MUC1/Y基因真核表达载体构建及MUC1、MUC1/Y体外修饰DC诱导特异性抗肿瘤免疫应答
目的构建MUC1/Y全长cDNA真核表达载体,并以MUC1及MUC1/Y真核表达载体修饰树突状细胞(DC)诱导特异性抗肿瘤免疫.方法构建MUC1/Y DNA真核表达载体,选取10例HLA-A2乳腺癌患者,体外IL-4、GM-CSF联合诱导DC,并以pCDNA3.1-MUC1和pCDNA3.1-MUC1/Y转染DC,同时以空载体为对照,以pIRES2-EGFP-MUC1/Y观察转染效率,转染后DC与自体T细胞混合培养,诱导CTL.以MCF-7为特异性靶细胞,Raji为非特异性靶细胞,通过乳酸脱氢酶释放实验检测杀伤活性,以anncxin V-FTTC检测特异性CTL诱导靶细胞凋亡的情况.以ELISA法测定基因修饰后DC刺激自体T细胞分泌IFN-γ的能力.结果酶切鉴定及测序结果表明成功构建了MUC1/Y真核表达载体pIReS2-EGFP-MUC1/Y和pCDNA3.1-MUC1/Y.pIRES2-EGFP-MUC1/Y转染效率基本为10%左右,DC中MUC1表达率为8%.杀伤实验表明T-DC-pCDNA3.1-MUC的杀伤活性为64%,T-DC-pCDNA3.1-MUC1/Y为46%.这两组间差异有显著性,同时与对照组比较差异均有显著性.annexin V-FTTC标记实验显示,T-DC-pCDNA3.1-MUC1对靶细胞的杀伤和诱导凋亡的能力显著高于T-DC-pCDNA3.1-MUC1/Y及对照组.基因修饰DC刺激自体T细胞分泌IFN-γ的能力显著升高.结论构建的真核表达载体pIRES2-EGFP-MUC1/Y可用于真核细胞转染并观察转染效率,易于筛选阳性克隆.经pCDNA3.1-MUC1及pCDNA3.1-MUC1/Y修饰的DC可有效诱导特异性免疫应答.
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MUC1/Y基因疫苗治疗膀胱肿瘤的实验研究
目的 探讨人黏蛋白MUC1/Y基因DNA疫苗诱导小鼠特异性细胞毒性T细胞(cytotoxic T lym-phocytes,CTL)及体液免疫应答的作用,为人膀胱癌疫苗的应用提供基础实验研究资料.方法 通过pEGFP-C3-MUC1/γ质粒免疫雄性BALB/c小鼠,采用ELISA法检测小鼠抗体生成情况和CTL分泌IL-2和IFN-γ的量,并用LDH释放法测定CTL对膀胱癌细胞株BIU-87的特异性杀伤率.结果 在接种疫苗的小鼠体内特异性抗体明显升高,CTL分泌的IL一2和IFN-γ较对照组高.在效靶比为100:1、50:1、25:1、12.5:1时,实验组特异性CTL对BIU-87杀伤率分别为50.9%、45.9%、47.5%和18.6%,而对照组(空载体pEGFP-C3和灭菌生理盐水)分别为18.3%、10.7%、13.8%、6.3%;16.5%、11.9%、8.6%和10.3%.实验组与对照组两者之间差异具有显著性(P<0.01).结论 MUC1/Y DNA疫苗能够诱导小鼠体内产生抗人膀胱癌黏蛋白的特异性抗体,并能诱导产生特异杀伤表达MUC1/Y的靶细胞的CTL,为MUCl/Y基因疫苗用于膀胱肿瘤生物免疫提供一种新的治疗策略.
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MUC1及同种型MUC1/Y基因mRNA在膀胱癌中的表达及临床意义
目的:探讨肿瘤相关抗原MUC1及同种型MUC1/Y粘蛋白基因在膀胱癌中mRNA的表达及其临床意义.方法:22例膀胱癌的组织样本(实验组)和10例正常膀胱组织样本(对照组)中提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测两组样本中MUC1及同种型MUC1/Y粘蛋白基因mRNA表达水平.结果:膀胱癌组织的MUC1 mRNA水平较正常膀胱组织显著增高(P＜0.01);Ⅲ-Ⅳ期膀胱癌组织的MUC1/YmRNA水平较Ⅰ-Ⅱ期膀胱癌组织显著增高(P＜0.01).结论:MUC1及同种型MUC1/Y粘蛋白基因mRNA表达水平与膀胱癌有关,对膀胱癌的诊断和治疗有临床意义.
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消化道肿瘤组织MUC1/Y基因表达及其临床意义
MUCI作为粘蛋白的一种,是重要的肿瘤相关抗原[1].
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应用噬菌体随机肽库筛选肿瘤MUC1/Y黏蛋白结合肽
目的:探索用噬菌体随机肽库筛选可用于肿瘤导向治疗的新型小分子载体.方法:以MUC1/Y黏蛋白的胞外段蛋白(MUC1/Yex)为靶分子,用凝胶亲和法和酶联板法分别筛选十二肽噬菌体随机肽库,ELISA鉴定阳性克隆,DNA序列测定后确定MUC1/Yex结合肽的氨基酸序列;免疫组化鉴定阳性噬菌体克隆与正常及肿瘤细胞的结合能力及特异性.结果:通过4轮筛选,共获得3种MUC1/Yex的结合肽,分别为HHWHSRSQLSWF,HLKHKNYLPPTP和GNWYRHPHYLQP,其中HXXHS表位可能在与MUC1/Yex的结合中起重要作用.阳性噬菌体克隆可与肿瘤细胞系MCF7,OVCA3,而不与正常外周血淋巴细胞结合.结论:筛选获得的MUC1/Yex结合肽具有一定的亲合力和肿瘤特异性,可进一步用于肿瘤导向治疗的研究.
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黏蛋白MUC1/Y在膀胱癌中的表达及其意义
目的:检测黏蛋白MUC1/Y在膀胱肿瘤病变中的表达,探讨其在膀胱肿瘤诊断和免疫治疗中的意义. 方法:采用免疫组化S-P法和高清晰度彩色医学图文分析系统,对48例膀胱肿瘤组织、45例腺性膀胱炎组织和10例正常膀胱组织(对照组)黏蛋白MUC1/Y的表达进行检测分析. 结果:MUC1/Y仅在膀胱肿瘤中表达,且平均灰度均显著低于腺性膀胱炎组织和正常膀胱组织(P<0.001). 结论:MUC1/Y为一种新型的肿瘤标记物,它在膀胱肿瘤组织的高表达,为膀胱癌诊断和免疫治疗提供了理论依据.
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人肿瘤MUC1/Y基因真核表达载体的构建及在BIU-87细胞中的表达
目的:克隆人肿瘤MUC1/Y全长基因及构建真核表达载体EGFP-MUC1/Y,并观察EGFP-MUC1/Y在BIU-87细胞中的表达,以进一步用于生物学功能及肿瘤生物学治疗的研究.方法:取新鲜膀胱肿瘤组织,提取总RNA,采用随机引物进行逆转录,将特异引物扩增的MUC1/Y全长PCR产物克隆至真核表达载体pEG-FP-C1,测序鉴定后命名为EGFP-MUC1/Y,用脂质体转染膀胱肿瘤细胞BIU-87,以Western Blot检测其表达情况.结果:酶切鉴定和序列分析证实构建质粒含人MUC1/Y全长cDNA编码序列,Western Blot检测和转染实验表明,构建的pEGFP-MUC1/Y基因在BIU-87真核细胞中表达,其绿色荧光蛋白瞬时表达率为20%.结论:人肿瘤MUC1/Y全长cDNA基因克隆及其真核表达载体pEGFP-MUC1/Y构建成功,可用于肿瘤生物学治疗的研究.
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粘蛋白MUC1及同种型MUC1/Y在膀胱癌与膀胱良性病变中的表达及其意义
目的:检测粘蛋白MUC1及其同种型MUC1/Y在膀胱癌和膀胱良性病变表达,探讨其在膀胱癌诊断和免疫治疗中的意义.方法:采用免疫组化SP法和高清晰度彩色医学图文分析系统,对48例膀胱癌组织、45例腺性膀胱炎组织和10例正常膀胱组织(对照组)粘蛋白MUC1及其同种型MUC1/Y的表达,进行检测分析.结果:MUC1在膀胱癌组织、腺性膀胱炎组织中的平均灰度均显著低于正常膀胱组织(P<0.001); MUC1/Y仅在膀胱癌中有表达.结论:MUC1、MUC1/Y 作为一种新型的肿瘤标志物,它们在膀胱癌组织的高表达及分布特点,可为膀胱癌诊断和免疫治疗提供实验基础.
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人肿瘤MUC1/Y基因真核表达载体的构建及在BIU-87细胞中的表达
目的:克隆人肿瘤MUC1/Y全长基因及构建真核表达载体pEGFP-MUC1/Y并观察pEGFP-MUC1/Y在 BIU-87细胞中表达以用于进一步生物学功能及肿瘤生物学治疗的研究.方法: 取新鲜膀胱肿瘤组织提取总RNA,采用随机引物进行反转录,将特异引物扩增的MUC1/Y全长PCR产物克隆至真核表达载体pEGFP-C1,测序鉴定后命名为pEGFP-MUC1/Y,用脂质体转染膀胱肿瘤细胞BIU-87,以Western Blot检测其表达情况.结果: 酶切鉴定和序列分析证实构建质粒含人MUC1/Y全长cDNA编码序列, Western Blot检测和转染实验,表明构建的pEGFP-MUC1/Y基因在BIU-87真核细胞中表达,其绿色荧光蛋白瞬时表达率为20%.结论:人肿瘤MUC1/Y全长cDNA基因克隆及其真核表达载体pEGFP-MUC1/Y 构建成功,可用于肿瘤生物学治疗的研究.
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MUC1/Y基因在胃肠道肿瘤中的表达及诱导抗肿瘤免疫
目的研究MUC1/Y基因异常表达在消化道肿瘤中的临床意义;构建MUC1/Y cDNA全长载体,修饰树突状细胞(DC)诱导杀伤细胞治疗消化道肿瘤.方法采用RT-PCR方法检测标本中MUC1/Y mRNA表达.选取8例HLA-A2+消化道肿瘤患者,体外诱导DC,以构建的MUC1/Y cDNA真核表达载体pcDNA3.1-MUC1/Y修饰DC诱导CFL.通过检测对靶细胞SW620和Raji的杀伤作用和诱导靶细胞凋亡的能力来评价抗肿瘤免疫反应.结果 93.88%肿瘤组织表达较高水平的MUC1/Y.分析表明:消化道肿瘤中MUC1/Y mRNA表达与组织学分型、肿瘤生长方式、浸润程度及TNM临床分期有关;与性别、肿瘤发生部位及分化程度无关.pcDNA3.1-MUC1/Y修饰DC诱导的CTL对特异性靶细胞的杀伤活性显著高于对照组,并能有效诱导靶细胞凋亡.结论 MUC1/Y mRNA表达在消化道肿瘤组织具有重要意义;经pcDNA3.1-MUC1/Y修饰的DC可有效诱导特异性抗肿瘤免疫应答.
