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两株双价痢疾菌苗免疫小鼠后GALT中CD4+、CD8+ T细胞亚群的反应
目的 FSM-2117和FS-5416是两株具有不同生物表型的福氏、宋内氏双价痢疾菌苗株,FSM-2117无侵袭表型,无溶血活性,不表达侵袭蛋白抗原(Ipa-),FS-5416则为Ipa+,本实验是为了观测两株菌苗(Ipa-,Ipa+)免疫后引起的肠粘膜相关淋巴组织(GALT)中的细胞免疫反应,以探明痢疾菌苗在肠粘膜的免疫保护机制.方法 以BALB/c小鼠随机分成两组,每组25只,灌胃免疫FSM-2117及FS-5416,8×108CFU/只,分别在1,4,7,10,13天随机取各组小鼠5只分离GALT淋巴细胞;同时设一组PBS对照组,以间接免疫荧光法检测GALT中诱导部位[派伊尔小结(PP)、肠系膜淋巴结(MLN)]及效应部位[上皮间淋巴细胞(IEL)、粘膜固有层(LPL)]T细胞亚群的变化,荧光显微镜计数200个细胞计算阳性率.结果 用SAS软件,单因素方差分析,表明两株双价菌苗株均可引起肠粘膜GALT中CD4+、CD8+淋巴细胞亚群改变,不同粘膜部位免疫反应不同.诱导部位(派氏小结、肠系膜淋巴结)CD4+细胞亚群明显升高,末次免疫后第7天达峰值,而后迅速下降;在效应部位,粘膜固有层表现为CD4+细胞亚群明显升高,而IEL主要表现为CD8+细胞亚群的升高,均于第7天达峰值.两株菌苗与对照组相比,差异都具有显著性(FSM-2117 P≤0.01,FS-5416 P＜0.01),但两菌苗株之间差别无统计学意义(P＞0.05).结论 两株双价痢疾菌苗均可在小鼠GALT引起免疫反应,说明其均有较好的免疫原性.
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双价痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠诱导粘膜与系统免疫反应
目的:探讨双价痢疾菌苗滴鼻免疫后对小鼠不同粘膜部位和系统免疫部位的影响.方法:BALB/c小鼠随机分为3组,每组20只,FSM-2117或FS-5416 4×107CFU/只经滴鼻途径免疫小鼠,间隔2 w,3次免疫后7 d活杀,分离NALT、鼻通道、脾、小肠PP及MLN淋巴细胞,采用流式细胞术检测其淋巴细胞表型的变化;收集鼻咽、肺、肠、生殖道冲洗液和血清,采用ELISA法检测其中特异性抗福氏、宋内氏LPS IgA和IgG.结果:两株菌苗经鼻内免疫都诱发了鼻咽、肺、胃肠道和生殖道等不同粘膜部位及血清中特异性抗福氏、宋内氏LPS IgA、IgG的显著增加(P＜0.01);NALT、NP和PP淋巴细胞中CD3+ T细胞显著增加,其中以CD4+ T细胞增加为主;FSM-2117免疫组的脾细胞中B220+ 细胞显著增加,而FS-5416免疫组的脾细胞中CD3+ T细胞显著增加.结论:两株菌苗经鼻粘膜免疫均可诱导不同粘膜部位及系统免疫反应的发生,鼻粘膜是一个安全有效的免疫途径.
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不同表型的双价痢疾菌苗的滴鼻免疫研究
为了探讨滴鼻免疫不同表型的双价痢疾菌苗的免疫效果，应用FSM-2117(Ipa)及FS-5402(Ipa＋)、FS-5411(Ipa＋)、FS-5414(Ipa＋)、FS-5416(Ipa＋)5株菌苗株分别滴鼻免疫小鼠，4×107CFU/只，间隔14 d，3次免疫后第7天收集血清和小肠、鼻咽、肺、阴道冲洗液，ELISA法检测其中特异性福氏、宋内LPS IgA和IgA抗体水平，发现滴鼻免疫能够诱生血清中的双价IgA、IgA抗体显著升高，Ipa＋株较Ipa-株升高显著(P＜0.01)。同时诱生鼻咽、肺、小肠内特异性抗体升高，尤其是生殖道冲冼液内抗体升高极为明显。表明鼻粘膜免疫不仅诱导多个粘膜部位(特别是生殖道)的抗体反应，且能诱导系统免疫反应，是一个安全有效的免疫途径。研究中发现侵袭蛋白表达在鼻粘膜部位能够显著加强系统特异性抗体生成。
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口服FS痢疾菌苗不良反应观察
为了解FS痢疾菌苗使用后的不良反应情况,我们在2000年对仙居县500名1～5岁儿童口服FS痢疾菌苗后的不良反应进行观察调查,结果报告如下.
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痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠诱导不同部位淋巴组织的免疫应答
目的探讨痢疾菌苗滴鼻免疫后,小鼠不同粘膜部位和其它部位免疫应答的影响.方法将Balb/c小鼠随机分为3组,每组15只.将痢疾菌苗株FSM-2117或FS-5416,按5×106、1×107、4×107和4×107CFU/只滴鼻免疫Balb/c小鼠4次,间隔两wk.分离鼻相关淋巴组织(NALT)、鼻通道(NP)及脾、小肠的PP结淋巴细胞.一部分细胞采用流式细胞术检测淋巴细胞表型的变化;另一部分细胞与全菌破碎抗原共培养,于不同时间点取出,提取RNA做RT-PCR.结果两株菌苗经鼻内免疫后,NALT、NP和PP结的淋巴细胞中CD3+ T细胞显著增加,其中以CD4+T细胞增加为主.FSM-2117株免疫组的脾细胞中,B220+细胞显著增加;而FS-5416株免疫组的脾细胞中,CD3+T细胞显著增加.免疫小鼠的NALT、NP和PP结淋巴细胞,在体外经抗原刺激后,均在不同时间出现IFN-γ和IL-4 mRNA 的表达,TGF-βmRNA的表达在免疫前后无明显变化. 结论痢疾菌苗经鼻粘膜免疫,可诱导不同粘膜部位及全身免疫应答的产生.
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双价痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠后不同部位淋巴细胞表型的变化
目的: 观测双价痢疾工程菌苗滴鼻免疫小鼠后, 不同时间、不同部位淋巴组织细胞表型的变化, 探讨痢疾菌苗滴鼻免疫对黏膜和系统免疫应答的影响.方法: BALB/c小鼠随机分为3组, 每组30只, 分别以FSM-2117和FS-5416痢疾菌苗经滴鼻途径免疫小鼠4次, 菌量依次为5×106、1×107、4×107和4×107 CFU/只, 对照组给予PBS, 间隔2 wk.4次免疫后7、30和90 d活杀, 分离NALT、鼻通道、脾、小肠PP结淋巴细胞, 采用流式细胞术检测其淋巴细胞表型的变化.结果: 4次免疫后7 d, 小鼠鼻相关淋巴组织(NALT)、鼻通道(NP)和Peyer ' s结(PP)淋巴细胞中, CD3+ T细胞数均显著增加, 其中以CD4+ T细胞增加为主.FSM-2117免疫组的脾细胞中B220+细胞显著增加; 而FS-5416免疫组的脾细胞中CD3+ T细胞显著增加.4次免疫后30 d, NALT、NP和脾淋巴细胞仍出现上述变化; 而90 d, 仅NALT和NP淋巴细胞出现上述同样变化.结论: 两株双价痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠后, 能有效地诱导黏膜和系统免疫应答, 且持续时间较长, 但该免疫应答的减弱是从距免疫部位较远的部位而开始的.
