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表达HIV-1 gag-gp120嵌合基因酵母工程菌的构建及表达条件的优化
目的构建表达HIV-1 gag-gp120嵌合基因的酵母工程菌,并优化表达条件. 方法将gag-gp120嵌合基因插入到酵母表达载体pHILS1中,构建了表达质粒pHILGP.线性化质粒电转化毕赤酵母菌GS115后进行整合,通过PCR及表达产物的SDS-PAGE和ELISA等方法筛选阳性酵母工程菌,并优化表达条件. 结果成功构建表达融合蛋白的酵母工程菌,表达量为13%左右.表达蛋白能与HIV-1阳性血清发生反应,但其相对分子质量(Mr)比预计计算的值要小.佳表达条件为:BMMY培养基,85%溶解氧,培养时间3*!d,1%甲醇诱导浓度. 结论表达的融合蛋白具有很好的抗原特异性,存在于上清中,这有利于目的蛋白的分离纯化.
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共表达HIV-1 gag-gp120与IL-6重组鸡痘病毒和核酸疫苗的联合免疫研究
目的探讨共表达HIV-1 gag-gp120与IL-6重组鸡痘病毒和核酸疫苗联合免疫小鼠的免疫应答. 方法以重组鸡痘病毒首免,以表达相同抗原的核酸疫苗质粒追加免疫,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平. 结果联合免疫组脾特异性CTL杀伤活性比重组鸡痘病毒单独免疫组、核酸疫苗单独免疫组、鸡痘病毒疫苗株对照组和空白质粒对照组高,血清抗体水平显著高于空白质粒对照组和鸡痘病毒疫苗株对照组,但与重组鸡痘病毒单独免疫组、核酸疫苗单独免疫组之间差异无显著性. 结论重组鸡痘病毒和核酸疫苗的联合免疫可诱导小鼠产生更强的细胞免疫应答.
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表达HIV-1 gag-gp120嵌合基因的DNA疫苗在小鼠体内的免疫应答
目的:检测表达HIV-1 gag-gp120嵌合基因的DNA疫苗在小鼠体内的免疫应答效果.方法:将真核表达质粒pVAXGE肌肉注射BALB/C小鼠,观察免疫小鼠脾T淋巴细胞亚群的数量、特异性CTL杀伤率及小鼠免疫后不同时间点血清中IgG抗体滴度.结果:重组质粒pVAXGE免疫组小鼠脾淋巴细胞进行了增殖,脾特异性CTL杀伤率显著高于对照组(P＜0.01);小鼠免疫后于第8周血清抗体达到高.结论:表达HIV-1 gag-gp120嵌合基因的DNA疫苗质粒可诱导BALB/C小鼠发生免疫应答.
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HIV-1结构蛋白gag-gp120与白细胞介素2联合基因免疫
在真核表达载体pVAX1中的CMV启动子下游插入IL-2基因,构建真核表达质粒pVAXIL2.将它与表达I型人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus 1, HIV-1) gag-gp120的核酸疫苗质粒pVAXGE共同肌肉注射BALB/c小鼠,免疫3次后,以ELISA法检测免疫小鼠血清中抗HIV-1抗体水平,结果显示联合免疫组小鼠在免疫2周后已有抗体产生,6周后进入高峰.乳酸脱氢酶释放法检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性,结果显示联合免疫组小鼠脾特异性CTL杀伤活性显著高于pVAXGE单独免疫组(P<0.05)和载体质粒pVAX1对照组(P<0.01).以上结果表明:HIV-1核酸疫苗质粒pVAXGE与真核表达质粒pVAXIL2联合免疫可诱导特异性体液免疫和细胞免疫应答,且免疫应答水平高于pVAXGE单独免疫组,IL-2发挥了免疫佐剂的作用,增强了核酸疫苗的免疫原性.
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Ⅰ型人免疫缺陷病毒gag-gp120嵌合基因核酸疫苗的构建与鉴定
目的: 构建含Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)gag-gp120嵌合基因核酸疫苗的表达质粒.方法: 将gag和gp120连接后的嵌合基因插入到真核表达载体pVAX1中, 构建真核表达质粒pVAXGE.用脂质体法将构建的重组质粒转染Hela细胞72 h后, 取转染的Hela细胞进行RT-PCR检测和和Dot-ELISA分析.结果: 重组质粒转染细胞的总RNA中, 可扩增出目的基因的转录产物.Dot-ELISA的结果显示, 目的基因在Hela细胞内得到表达.结论: 成功地构建了表达gag-gp120嵌合基因的核酸疫苗质粒, 为HIV-1核酸疫苗的制备奠定基础.
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IL-18和HIV-1 gag-gp120嵌合基因DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答
目的:探讨IL-18和HIV-1 gag-gp120嵌合基因的DNA疫苗联合免疫小鼠的免疫应答.方法:构建含IL-18的真核表达质粒pVAXIL18,将他与表达HIV-1 gag-gp120嵌合基因的核酸疫苗质粒pVAXGE共同肌注免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度.结果:联合免疫组小鼠脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体水平均显著高于单独免疫组(P＜0.05),空白质粒对照组(P＜0.01)和PBS对照组(P＜0.01).结论:IL-18和HIV-1 gag-gp120嵌合基因的DNA疫苗联合免疫可诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫,且IL-18发挥了免疫佐剂的作用.
