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鹦鹉热嗜衣原体蛋白酶样活性因子免疫优势区基因重组蛋白的诊断应用研究
目的 检测鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci,Cps)蛋白酶样活性因子(chlamydial protease-like activity factor,CPAF)免疫优势区基因在E.coli BL21中高效表达的产物在Cps感染诊断中的应用,为建立Cps感染的快速诊断奠定实验基础.方法 利用生物信息学软件筛选出Cps CPAF免疫优势区基因序列(CPAFm,A196～A450),设计特异性引物,PCR扩增目的基因,将其克隆入pGEX6p-2载体后转化E.coli BL21,利用IPTG诱导表达重组蛋白,Western blot鉴定重组蛋白.以纯化的重组蛋白作为包被抗原,建立血清学诊断的间接ELISA法；同时用商品ELISA试剂盒与建立的间接ELISA法检测180份可疑Cps感染的病鸭血清标本,将检测结果进一步用Western blot方法验证.结果 构建原核重组质粒pGEX6p-2/CpsCPAFm,表达相对分子质量约为54×103的目的蛋白产物.以纯化的重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法检测Cps参考血清,其阴、阳性符合率均为100％；与肺炎嗜农原体(C.pneumoniae,Cpn)、沙眼衣原体(C.trachomatis,Ct)无交叉反应.对180份可疑病鸭血清标本进行检测,与商品Birds Chlamydia Psittaci IgG ELISA试剂盒比较,以Western blot方法作对照,自建的ELISA法符合率均为100％,Birds Chlamydia Psittaci IgG ELISA Kit符合率为77.5％～95.0％.结论 以Cps CPAF免疫优势区(A196～A450)作为诊断抗原,建立血清学诊断的间接ELISA法具有较好的临床诊断价值.
关键词： 鹦鹉热嗜衣原体 衣原体蛋白酶样活性因子 免疫活性 血清学诊断 -
肺炎嗜衣原体蛋白酶样活性因子重组蛋白的表达与临床应用
目的 探讨肺炎嗜衣原体(CPN)蛋白酶样活性因子(CPAF)重组蛋白在CPN感染实验室诊断中的应用价值.方法 构建CPAF免疫优势区基因重组质粒,诱导表达并纯化重组蛋白,分析其抗原特异性;间接 ELISA法检测CPN参考血清、临床血清标本中的特异性IgM和IgG抗体.以及沙眼衣原体(Ct)阳性血清.结果 高效表达和有效纯化出一相对分子质量(Mr)约为5.13×10~3的特异性重组蛋白;间接ELISA法测定用其免疫兔血清中的特异性IgG和IgM抗体效价,分别高达1:16 000和1:8 000;检测Cpn IgM和IgG参考血清,阴性和阳性结果符合率均为100.0%;与"金标准"方法MIF比较,检测300份呼吸道感染患者抗血清,IgM、IgG符合率分别为98.3%、99.0%;检测Ct阳性参考血清和阳性临床血清标本,无阳性结果.结论 表达的CPN CPAF免疫优势区重组蛋白具有良好的抗原性,在CPN感染的实验室诊断中具有较高的应用价值.
关键词： 肺炎嗜衣原体 衣原体蛋白酶样活性因子 重组蛋白 实验室诊断 -
衣原体蛋白酶样活性因子的研究进展
衣原体蛋白酶样活性因子是迄今发现的唯一由衣原体合成,并分泌到宿主细胞的蛋白,具有较强的免疫原性并可降解宿主转录因子RFX5和上游刺激因子USF-1,在衣原体致病过程中发挥重要作用.对该因子的研究将有助于进一步了解衣原体的致病机制,寻找更好的诊断方法和防治措施.现对其结构、生物学性质以及在致病过程中的作用作一介绍.
关键词： 衣原体科 衣原体蛋白酶样活性因子
