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三亲杂交文献资料
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铜绿假单胞菌耐药性在生物被膜形成过程中的变化
目的研究铜绿假单胞菌遗传性耐药(gyrA基因突变和MexAB-OprM主动外排)在生物被膜形成过程中对药物抗性的作用. 方法通过PCR技术鉴定gyrA基因突变株和MexAB-OprM主动外排株,利用三亲杂交的方法将绿色荧光蛋白(GFP)基因转到铜绿假单胞菌药物敏感株中,测定gyrA基因突变株、MexAB-OprM主动外排株以及带有绿色荧光蛋白的铜绿假单胞菌在特氟隆上产生生物被膜耐药的规律. 结果筛选出gyrA基因突变株和MexAB-OprM主动外排株.通过三亲杂交成功构建了带有pGFPuv质粒的铜绿假单胞菌.将突变株和敏感株培养在低杀菌浓度(MBC)的环丙沙星溶液中形成生物被膜使菌株的存活率均在50%以上. 结论比较遗传性耐药和生物被膜耐药的作用表明gyrA基因突变和主动外排在生物被膜耐药形成前期发挥主要作用,当生物被膜完全形成之后,铜绿假单胞菌的耐药性有可能是由生物被膜介导的.
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利用电转化和三亲杂交方法高效转化根癌农杆菌
目的探索根癌农杆菌的高效转化方法.方法考察质粒经电击转化法转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens LBA4404)的影响因素,并优化其转化条件;研究采用三亲杂交方法,将带有vgb基因簇的重组质粒pYG308导入A. tumefaciens LBA4404;经PCR扩增反应进行验证.结果外加电场强度和脉冲时间是决定电转化效率的关键因素,两者适当组合才可获得高转化效率;采用对数期中期的细菌和提高细菌浓度均可提高转化效率.用三亲杂交方法转化A.tumefaciens LBA4404,可得到较高的转化效率.所获抗性转化子的质粒DNA酶切图谱正确.结论 带有双元载体(含vgb基因)的根癌农杆菌构建成功.
