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Heymann肾炎受体相关蛋白羧基端融合蛋白的表达及其对nephrin表达和分布的影响
目的 探讨Heymann肾炎(HN)受体相关蛋白(RAP)羧基端抗原决定簇在HN发病机制中的作用.方法 通过PCR及分子克隆技术,构建RAP全长和羧基端多肽的原核融合表达载体,表达融合蛋白,制备针对RAP全长和羧基端融合蛋白的抗血清,免疫荧光法检测其在肾组织中的定位.利用该抗血清制备两种HN模型,测定24 h尿蛋白定量,免疫荧光法检测肾组织中nephrin表达和分布,并比较组间差异.结果 成功构建了重组原核表达载体pGEX-4T-1-RAP1083/324,表达了RAP全长(相对分子质量,70×103)和羧基端(40×103)的融合蛋白,并制备了相应的抗血清,免疫荧光显示制备的两种抗血清均对肾小管上皮细胞有高亲和性.利用两种抗血清成功制备了HN模型,模型组大鼠24 h尿蛋白定量分别达(21.31±4.15)mg和(19.05±3.72)mg,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).nephrin在RAP324诱发的大鼠HN肾组织中表达较RAP1083中减弱明显.结论 Heymann肾炎RAP羧基端存在病理性抗原决定簇,能够诱发大鼠HN模型.nephrin在两种HN中表达减少,推测RAP作用机制与减少肾小球内nephrin的表达有关.
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甲状旁腺素羧基端肽段的表达及其对大鼠成骨细胞增殖的影响
目的：探讨 rhPTH1～84、rhPTH37～84及 hPTH1～34对大鼠成骨细胞增殖的影响。方法分子生物学方法克隆表达 hPTH1～84、hPTH37～84重组蛋白。体外培养的大鼠成骨细胞给予不同浓度的 PTH 作用后，采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖。结果获得了浓度约为261．82 mg／L 的 rhPTH1～84和浓度为165．45 mg／L 的rhPTH37～84。10－10～10－7 mol／L 范围的 rhPTH1～84和 hPTH1～34促进大鼠成骨细胞的增殖；rhPTH37～84则抑制大鼠成骨细胞增殖。结论成功获得了高浓度高纯度的 rhPTH1～84及 rhPTH37～84。rhPTH37～84抑制细胞增殖，为进一步研究甲状旁腺激素及其羧基端肽段的功能奠定了基础。
