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钩端螺旋体 LPS 和外膜蛋白诱导巨噬细胞凋亡及其与 Fas/FasL 相关性研究
目的:了解致病性问号钩体螺旋体(简称钩体)脂多糖( L-LPS)和外膜蛋白( L-OMP)诱导J774A.1小鼠巨噬细胞死亡及其与Fas/FasL相关性。方法分别采用酚水法和Triton X-114法从问号钩体黄疸出血群赖型赖株中提取L-LPS和L-OMP。采用流式细胞术检测紫外线灭活前后问号钩体赖株、多黏菌素B(PMB)处理前后L-LPS、蛋白酶K(PK)作用前后L-OMP诱导J774A.1细胞凋亡及坏死情况。采用siRNA沉默J774A.1细胞Fas或FasL基因并用实时荧光定量RT-PCR检测靶基因沉默效果。采用流式细胞术测定L-LPS或L-OMPs诱导Fas或FasL基因沉默J774 A.1细胞凋亡的作用。结果紫外线灭活前后问号钩体赖株可引起相似的J774A.1细胞早期凋亡率(55.6%和47.1%)和晚期凋亡/坏死率(7.9%和7.6%)。100 ng L-LPS或100μg L-OMP作用1×105 J774A.1细胞4 h后,早期凋亡率和晚期凋亡/坏死率分别为40.4%和34.0%、7.5%和6.9%,但等量PMB预处理L-LPS或PK预处理L-OMP诱导细胞凋亡或坏死的作用消失。 Fas或FasL基因沉默后,L-LPS诱导的J774A.1细胞早期凋亡率均显著下降(P<0.05),L-OMP仅使Fas基因沉默J774A.1细胞早期凋亡率有所下降(P<0.05)。结论 L-LPS和L-OMP可诱导Fas/FasL相关巨噬细胞凋亡,从而有利于问号钩体在宿主体内建立有效感染。