首页 > 文献资料
-
乙型肝炎病毒E抗原肝细胞作用蛋白AK026018表达谱芯片的研究
目的应用基因芯片技术,筛选能被乙型肝炎病毒E抗原(HBeAg)肝细胞作用蛋白AK026018反式调节的靶基因,初步研究该蛋白的生物学功能.方法应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从HepG2细胞中扩增编码AK026018蛋白的全基因,构建真核表达载体,转染肝母细胞瘤系HepG2,提取总mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较.结果经限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定构建的重组表达载体正确.在8464个基因表达谱的筛选中,发现有122个基因有差异表达,其中78种基因表达水平显著下调,45种基因表达水平显著上调.结论成功地应用DNA芯片技术筛选出HBeAg结合蛋白新基因AK026018的反式调节蛋白,证明该基因对于肝细胞基因表达谱有显著影响.
关键词： 肝炎病毒 乙型 肝炎E抗原 AK026018基因 表达谱芯片 -
乙型肝炎病毒e抗原在肝细胞内作用蛋白AK026018亚细胞定位的研究
目的:确定肝细胞内乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)作用蛋白AK026018的亚细胞定位,初步研究该蛋白的生物学功能.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从HepG2细胞中扩增编码AK026018蛋白的全基因,构建真核表达载体pEGFP-AK,转染HepG2、293T细胞系,在激光共聚焦荧光显微镜下与转染空载体pEGFP-N1的细胞比较观察.结果:经限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定构建的重组表达载体正确.通过激光共聚焦荧光显微镜观察,转染了重组载体pEGFP-AK的细胞绿色荧光信号较集中分布于胞浆中,而空载体pEGFP-N1转染的细胞绿色荧光信号在整个细胞中均匀分布.结论:成功分离了AK026018全基因序列并构建了真核表达载体,该基因表达产物亚细胞定位于细胞浆中.
-
乙型肝炎病毒HBeAg与AK026018基因表达产物的结合能力
目的验证乙型肝炎病毒HBeAg与AK026018基因表达蛋白在细胞内及细胞外的结合作用.方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从HepG2细胞中扩增AK026018基因序列,构建真核表达载体,与HBeAg真核表达载体共转染营养缺陷酵母细胞,观察生长情况.同时进一步应用网织红细胞裂解体外翻译及免疫共沉淀系统,验证AK026018蛋白与HBeAg间的确切结合作用.结果经限制性内切酶分析和DNA序列测定构建的AK026018重组表达载体正确.共转染后的酵母细胞在营养缺陷培养基中生长良好.体外免疫共沉淀实验可见特异放射自显影带.结论HBeAg与AK026018基因编码蛋白在细胞内及细胞外均能相互结合,推测该分子在HBV的致病过程中起着重要作用.
关键词： 肝炎E抗原 乙型 AK026018基因 酵母菌 沉淀
