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HCV E1基因序列的原核高效表达及表达产物的初步应用
目的在原核表达系统中对HCV E1基因进行克隆和高效表达，并初步探讨表达产物在抗-HCV筛选中的作用。方法通过RT-PCR法从HCV RNA阳性的血清标本中扩增出HCV EI片段，并在扩增用的引物中引入克隆所需的酶切位点，克隆产物经Xba I和EeoR I酶切后，在T4DNA连接酶的作用下克降入经同样双酶切的原核表达载体PMS-31b中，并用此连接产物转化大肠埃希菌POP2136，挑取具有氨苄抗性的菌落扩大培养后提取质粒进行酶切鉴定，鉴定出的阳性菌经42℃诱导后用SDS-PAGE检查其表达状况，并用Western blot鉴定表达产物的特异性，同时用初步纯化的表达产物用ELISA法检测病人血清。结果经Sma I酶切后PCR产物被切成144 bp和356 bp的两个片段，在具有氨苄抗性的菌中提取的质粒经Sma I和Xba I酶切后产生了一356 bp的片段；42℃诱导后在SDS-PAGE中出现了一条相对分子质量为31 000的条带，其表达量约为17％，经West-ern blot鉴定后在该处出现了阳性信号；ELISA实验显示在抗HCV阳性的血清中的阳性率约为29.8％(26/90)，而在抗HCV阴性的血清中其阳性率约为3.9％(3/76)。结论通过RT-PCR方法将HCV E1基因从HCV RNA阳性的血清标本中调出，构建了HCV E1的原核表达载体-PMS-E1，其表达量为17％，表达产物具有良好的特异性，有望应用于抗HCV的检测中。
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膜活性肽在胞内靶向给药系统中的应用
药物的靶向给药从到达的部位讲可以分为3级,第1级指到达特定的器官或组织;第2级指到达器官或组织内的特定的细胞(如肿瘤细胞而不是正常细胞,肝细胞而不是Kupffer细胞),第3级指到达靶细胞内的特定的细胞器(例如溶酶体,线粒体)[1].至今,前两级的靶向给药系统研究已经取得了长足的进步.
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乙型肝炎外膜大蛋白血清学检验及临床意义
目的:探讨乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP)检测的临床意义.方法:收取223例慢性乙型肝炎患者血清,用荧光聚合酶链反应(PCR)定量法检侧乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸HBVDNA,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测HBV-LP,前S1抗原(Pre-Sl Ag),用时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎病毒血清标志物.结果:HBVDNA与HBV-LP阳性率比较差异有显著性(P<0.001).HBV-LP与Pre-SlAg阳性率比较差异有显著性(P<0.001).HBeAg与HBVDNA,HBV-LP及Pre-SlAg阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:血清HBV-LP检测是对病毒复制检侧的补充.
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血清乙肝病毒外膜大蛋白检测在乙肝诊断治疗中的应用
目的 通过检测乙肝病毒患者血清中乙肝病毒外膜大蛋白(HBV-LP)、HBV-DNA、乙肝前SI蛋白(PreSlAg)以及乙肝两对半(HBVM),探讨HBV-LP与HBV-DNA、HBeAg、PreSlAg的关系及其在临床诊断、治疗中的应用价值.方法 共检测174例乙肝病毒患者血清标本,HBV-LP、PreSlAg以及HBVM采用ELISA法进行检测,采用实时荧光定量PCR方法检测HBV-DNA.结果 在乙肝病毒感染者血清中,HBV-LP、HBV-DNA和PreSlAg的阳性率分别为83.3%、78.2%和65.5%,前两者与后者比较有统计学意义(P＜0.05);随HBV-DNA拷贝数的增加,HBV-LP与PreSlAg的阳性率随着增加,同时HBV-LP吸光度OD值也随着增加.对HBeAg阴性的血清,HBV-LP的阳性率(79.1%)明显高于PreSlAg的阳性率(65.6%)(P＜0.05).结论 HBV-LP与HBV-DNA有良好的正相关性,HBV-LP与HBV-DNA的符合率高于PreSlAg,HBV-LP检测可以作为反映乙肝患者病毒复制的血清免疫学指标,也可作为判断HBV感染者体内病毒复制程度的可靠指标.
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乙肝患者血清外膜蛋白对判定HBV复制的意义
目的:探讨HBV感染者血清中PreSl-Ag、PreS2-Ag、大蛋白(LP)的检测意义及其对判定HBV复制的意义.方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA) 检测201例HBV感染血清的PreSl-Ag、PreS2-Ag、HBV-LP及HBV M,同时应用荧光定量PCR方法检测HBV DNA.结果:PreSl-Ag、PreS2-Ag、LP、HBsAg阳性率差异有统计学意义,PreS2-Ag、LP检出阳性率均高于HBeAg;LP的检出阳性率与HBV DNA的检出阳性率相关性有统计学意义,且HBV DNA 拷贝数的对数值与HBV-LP表达呈正相关.结论:PreSl-Ag、PreS2-Ag、LP较准确的反映乙肝病毒的复制情况,是HBV M有益的必要补充;血清中HBV-LP的含量与HBV DNA的拷贝数具有较好的相关性.
