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MicroRNA-382对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响
目的:探讨microRNA-382(miR-382)对脐带间充质干细胞(hUC-MSC)生物学特性的影响,以更深入的了解miRNA在MSC生物学特性中的调节机制.方法:对贴壁培养的hUC-MSC分别以miR-382 mimics及miR-382 in-hibitor转染,在倒置显微镜下观察细胞形态变化;使用CCK-8检测miR-382转染对hUC-MSC增殖的影响;分别使用油红O和茜素红染色检测miR-382对hUC-MSC成脂及成骨分化的影响,并使用氯化十六烷基吡啶溶解茜素红检测其吸光度值以定量分析成骨情况,以RT-PCR检测Runx2基因表达情况;使用RT-PCR方法检测miR-382对hUC-MSC分泌细胞因子基因表达的影响.结果:miR-382对hUC-MSC的形态无影响;miR-382不影响hUC-MSC的增殖;miR-382可以抑制hUC-MSC成骨分化而不影响其成脂分化;miR-382可以影响hUC-MSC细胞因子基因的表达,如IL-6,IDO1,G-CSF,M-CSF和GM-CSF的表达.结论:miR-382可以抑制hUC-MSC的成骨分化,并对其所分泌细胞因子的基因表达产生影响.
关键词： 脐带间充质干细胞 microRNA-382 生物学特性 -
微小RNA-382在肾小管间质纤维化发病中的作用及其分子机制
目的 研究微小RNA-382(miR-382)在肾小管间质纤维化(TIF)发病中的作用及相关机制.方法 通过抑制miR-382的表达,观察其丰度对人近端肾小管上皮细胞(HK2)转分化的影响,并验证miR-382与其预测靶基因热休克蛋白60(HSPD1)的互补配对关系.建立小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型,经尾静脉注射锁核苷酸(LAN)修饰的anti-miR-382,观察抑制miR-382表达对梗阻侧肾小管间质病变及肾组织硫氧还原蛋白(Trx)水平的影响.收集有和无明显TIF的IgA肾病(IgAN)患者肾穿刺标本各6例,原位杂交和免疫组化法检查TIF程度及抗氧化应激水平,分析其与miR-382/HSPD1表达的相关性.结果 体外荧光素酶报告基因检测和定点突变实验结果证实HSPD1为新的miR-382对应的直接靶基因.TGF-β1诱导HK2细胞发生转分化,与对照组相比,TGF组miR-382表达水平显著上调[(6.54±0.96)比(1.12±0.26),P＜ 0.05];阻断miR-382可使TGF-β1诱导的上皮转分化部分被逆转.体内实验结果表明,UUO模型组小鼠发生明显TIF病变,与假手术组相比,模型组miR-382丰度明显上调[(6.89±2.47)比(1.00±0.42),P＜ 0.05],HSPD1和Trx蛋白表达水平明显下调.10 mg/kg LNA-anti-miR-382干预组miR-382表达下调,梗阻侧肾组织TIF程度减轻,HSPD1和Trx的蛋白表达水平上调(均P＜ 0.05).IgAN患者肾组织检查结果提示,与无纤维化组相比,纤维化组肾组织miR-382丰度明显上调,HSPD1蛋白表达水平则明显降低(均P＜0.05).结论 miR-382在人类及小鼠TIF发病中起重要作用,HSPD1是miR-382的直接靶基因.HSPD1表达下调导致相应的抗氧化应激能力减弱可能是miR-382参与TIF的机制之一.
关键词： 纤维化 肾间质 热休克蛋白60 microRNA-382 氧化应激 -
过表达miR-382的肿瘤相关巨噬细胞对三阴性乳腺癌生物学特性的影响
目的 探讨microRNA-382 (miR-382)在肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)中的表达对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞(4T1)生物学特性的影响.方法 以小鼠腹腔巨噬细胞(mouse peritoneal macrophages,PMs)作为研究对象,分为PMs组,TAMs组和L-TAMs组;Western blot与qRT-PCR检测极化指标(IL-10、TNF-α)、miR-382、PGC-1α和NF-κB的表达变化;流式细胞术检测TAMs的极化变化(CD86、CD206);激光共聚焦显微镜成像检测PGC-1α和NF-κB的表达变化;以4T1细胞作为研究对象,分为4T1组,4T1+PMs组和4T1+L-PMs组,流式细胞术检测细胞凋亡率与细胞周期;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力.结果 与PMs组比较,TAMs组IL-10、CD206和PGC-1α表达明显增加(P＜0.05),miR-382、TNF-α和CD86表达明显降低(P＜0.05),NF-κB转录活性显著降低(P＜0.05),而L-TAMs组TNF-o、CD86和miR-382表达明显增高(P＜0.05),IL-10、CD206和PGC-1α表达明显降低(P＜0.05),NF-κB转录活性显著增强(P＜0.05);与4T1组比较,4T1+PMs组侵袭能力明显增强(P＜0.05),凋亡率明显下降(P＜0.05),而4T1+L-PMs组侵袭能力明显下降(P＜0.05),凋亡率明显增高(P＜0.05).结论 TAMs通过调节miR-382的表达可抑制TNBC的侵袭和增殖,其机制可能与TAMs中miR-382抑制PGC-1α的表达、增强NF-κB的转录活性,进而抑制TAMs的M2分化有关.
关键词： 三阴性乳腺癌 巨噬细胞 microRNA-382 生物学特性
