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小檗胺对K562细胞体外及体内作用的实验研究
为了探讨小檗胺(berbamine,BER)在体外及体内抗人白血病细胞株K562细胞的作用及其可能的机制,用MTr法测定K562细胞的增殖抑制,用流式细胞术检测凋亡细胞,用RT-PCR方法检测bcr/abl基因表达,用Westem blot方法检测BCR/ABL蛋白质水平表达,利用K562细胞荷瘤裸鼠模型观察小檗胺治疗后瘤体大小、组织病理及bcr/abl基因表达的改变.结果表明:小檗胺对K562细胞有明显的增殖抑制作用,呈时间-浓度依赖关系.经8.0μg/ml BER作用24、48、72小时,对K562细胞的抑制率分别为(26.63±3.57)%,(61.84±4.74)%,(75.32±1.95)%,与对照组相比,P＜0.01.IC50值(72小时)为(5.227±1.307)μg/ml.与空白对照组相比,经8.0μg/ml小檗胺处理72小时后,K562细胞凋亡率明显增加[(61.77±4.35)%vs(0.50±0.14)%,P＜0.01].小檗胺能下调K562细胞bcr/abl mRNA表达和P210水平,且呈浓度-时间依赖效应,并与细胞凋亡率有一定的相关性.经8.0μg/ml BER处理后,与同浓度点对照组相比,72小时组的表达明显地减弱(0.97±0.01vs1.38±0.02,P＜0.01).4.0-16.0μg/ml BER处理24小时后,P210的相对表达量由未加药对照组的1.04±0.02降至16.0μg/ml组的0.63±0.01(P＜0.01),与所设的对照组药物酪氨酸蛋白激酶抑制剂STI571的作用结果相似.在K562荷瘤裸鼠模型,小檗胺治疗组瘤重较未治疗对照组的明显减少[(1.46±0.43)g vs(2.90±0.94)g,P＜0.01],抑瘤率为49.66%.瘤体细胞的bcr/abl mRNA的表达水平明显下调.结论:小檗胺在体外对K562细胞具有明显的增殖抑制作用及明确的诱导凋亡作用,并呈时间-浓度依赖关系;小檗胺诱导细胞凋亡可能与其下调bcr/abl基因和(或)P210的表达水平有关;在荷瘤裸鼠体内,小檗胺同样具有显著的抑制K562细胞生长的作用,尤其能下调瘤体组织细胞bcr/abl mRNA的表达水平.
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类人慢性粒细胞性白血病小鼠模型的建立
目的:为了迸一步阐明慢性粒细胞性白血病(chronic myeloid leukemia,CML)的发病机制、寻找新的治疗靶点,有必要建立CML动物模型.方法:首先改进逆转录病毒包装技术,在相同实验条件下,改变以下条件之一,如质粒的质量、包装细胞的状态、转染当天包装细胞的密度等,进行病毒滴度的测定,优化实验条件后进行后续实验.实验组为BCR/ABL(含BCR/ABL融合基因的逆转录病毒载体)组小鼠.供体小鼠经5-氟尿嘧啶(5-FU)预处理后,骨髓细胞经p210 BCR/ABL逆转录病毒上清感染,感染的骨髓细胞经尾静脉注射给经致死剂量X光照射的受体小鼠.观察移植后BCR/ABL组小鼠的活动情况、发病鼠外周血和骨髓的细胞形态、肝脾病理改变等.同时观察MigR1(逆转录病毒空载体)组小鼠.结果:通过提高质粒的质量、改善包装细胞的状态、优化转染当天包装细胞的密度等,提高了病毒的滴度,用于小鼠移植模型实验.BCR/ABL组小鼠均于移植后19 ～25 d发病死亡.发病时外周血及骨髓均见中晚幼及成熟粒细胞大量增生,肝脾肿大伴正常结构破坏及大量粒细胞浸润.MigR1组小鼠均无发病.结论:通过改进逆转录病毒包装技术,提高包装病毒的滴度,我们在体外将BCR/ABL转入小鼠骨髓细胞并移植入受体小鼠,成功建立了类人CML小鼠模型.
关键词： BCR/ABL融合蛋白 慢性粒细胞性白血病 模型 动物 -
PTD-ABD融合蛋白对髓系白血病细胞的增殖和凋亡的影响
目的 研究癌基因BCR/ABL C末端肌动蛋白结合域(actin-binding domain,ABD)蛋白对白血病细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建含有ABD基因的重组表达载体,应用蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)将蛋白转入白血病细胞内,应用Westem blot与免疫荧光法确定蛋白是否进入白血病细胞,然后分别应用流式细胞仪及MTT法检测融合蛋白对白血病细胞凋亡及增殖的影响.结果 成功构建PTD-ABD融合表达载体,获得高纯度PTD-ABD融合蛋白.同时构建PTD表达载体并获得高纯度表达蛋白.将PTD、PTD-ABD蛋白与白血病细胞K562、HL60共培养,Westernblot与免疫荧光法确定PTD、PTD-ABD蛋白成功进入细胞内.与阴性对照比较,PTD-ABD蛋白能显著抑制HL60细胞的生长,并且对HL60细胞的凋亡具有明显的促进作用,差异具有统计学意义(P＜0.05),但对K562细胞的增殖及凋亡无影响(P＞0.05);PTD蛋白对K562、HL60细胞的增殖及凋亡无影响,与阴性对照比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PTD转导的ABD蛋白抑制HL60细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.
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针对bcr/abl融合蛋白的治疗研究进展
bcr/abl融合蛋白在慢性粒细胞白血病的发生与发展中扮演着重要的角色,针对bcr/abl为靶点的治疗已成为当前研究的热点.结合近年来的大量相关文献,对目前的研究现状进行综述并给予相应的评价.
关键词： 慢性粒细胞白血病 BCR/ABL融合蛋白 治疗
