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新一代重组人粒细胞集落刺激因子的工业化发酵、复性和纯化
工业化大规模发酵、复性和纯化突变型人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSFa),并测定其体外生物学活性.利用定点突变和DNA重组技术获得突变型G-CSF(rhG-CSFa).通过40 L发酵罐发酵基因工程菌株获得rhG-CSFa包涵体,经过一系列透析后,通过离子交换柱和分子排阻层析进行纯化,并使用高效液相色谱技术对纯化后的rhG-CSFa进行纯度分析.利用G-CSF依赖细胞株(M-NFS-60)测定纯化后的rhG-CSFa体外活性效价.结果表明,rhG-CSFa表达量占全菌蛋白的31.2％,通过优化复性条件,rhG-CSFa复性率达到11.36％,纯化后rhG-CSFa的纯度达到99.11％.体外活性实验显示,与野生型G-CSF相比,rhG-CSFa在相同浓度下能诱导NFS -60细胞株获得更高的细胞增殖率.rhG-CSFa工程菌株能够高表达rhG-CSFa,可用于工业化大规模生产,生产的rhG-CSFa具有较高的生物活性、稳定性和纯度.rhG-CSFa大规模生产的成功为该药物未来的临床运用打下了良好的基础.
关键词： 重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF) 发酵 复性 纯化 生物活性 -
不同剂量的rhG-CSF对恶性血液病患者化疗后白细胞减少持续时间及白细胞水平的影响
目的:比较不同剂量rhG-CSF对恶性血液病患者化疗后白细胞减少持续时间和外周血象的影响.方法:选取2011年12月-2016年6月期间我院收治的90例的恶性血液病患者作为观察组;选取2004年1月-2007年1月期间的30例患者作为对照组,所有患者均接受标准化疗方案.将观察组患者随机分为A(rhG-CSF 200 μg/m2)、B(rhG-CSF 300 μg/m2)和C(rhG-CSF 400 μg/m2)3组.比较观察组和对照组化疗前后白细胞低值(WBCmin)及其持续时间,高值(WBCmax)及其出现时间;比较患者治疗期间的感染发生率、rhG-CSF的总用量及不良反应发生率.结果:对照组外周血WBCmin为(1.30±0.11)×109/L,持续时间(3.2±0.7)d,WBCmax为(5.14±0.41)×109/L,出现时间(26.1 ±1.8)d;A组分别为(3.14 ±0.23)×109/L,(2.7±1.0)d,(10.08±0.69)×109/L及(14.9±1.8)d;B组分别为(3.11±0.32)×109/L,(0.9 ±0.5)d,(10.17±0.75)×109L及(10.7±1.5)d;C组分别为(3.15±0.30)×109/L,(0.5±0.3)d,(11.95±0.86)×109/L及(10.6±1.5)d.与对照组相比,A、B、C组WBCmin持续时间缩短,WBC数小值及大值均明显升高,WBC大值出现提前,其差异均有统计学意义(P＜0.05).对照组感染率33.33％,显著高于C组的3.33％ (P ＜0.05);A、B、C组间感染率、不良反应发生率及rhG-CSF的差异无统计学意义(P＞0.05).结论:与低剂量的rhG-CSF相比,中、高剂量的rhG-CSF能够明显缩短恶性血液病患者化疗后白细胞减少持续时间.
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rhIL-11和rhG-CSF对中子照射致小鼠骨髓损伤的治疗作用
目的 探讨rhIL-11和rhG-CSF对中子照射致小鼠骨髓损伤的治疗作用.方法 将BALB/c小鼠130只用随机数字表法分为对照组(30只)、照射组(40只)、rhIL-11治疗组(30只)、rhIL-11+rhG-CSF治疗组(30只),用3.0 Gy中子照射,并于照射后给予600 μg·kg-1·d-1的rhIL-11和50 μg·kg-1·d-1的rhG-CSF,1次/d,共3 d;用血细胞自动分析仪、HE染色、AgNOR染色、流式细胞术、免疫组织化学染色和图像分析等,检测小鼠外周血细胞、骨髓病理形态变化、有核细胞计数、AgNOR含量、凋亡与坏死率和Bax蛋白含量的变化.结果 照射组和rhIL-11治疗组于照射后6 h～3 d,小鼠外周血白细胞、骨髓有核细胞计数和AgNOR含量进行性下降,Bax蛋白于造血细胞胞质内呈阳性至强阳性表达,含量进行性增加(F=0.003,P<0.01);照射后6 h,照射组小鼠造血细胞凋亡与坏死率增加,以坏死为显著;照射后3 d,rhIL-11+rhG-CSF治疗组小鼠的骨髓有核细胞计数和AgNOR含量均增加(F=0.037、0.026,P<0.05),Bax蛋白含量减少(F=0.018,P<0.05);rhIL-11治疗组各指标较照射组差异无统计学意义.结论 3.0 Gy中子照射可使小鼠骨髓造血功能严重受损,rhIL-11和rhG-CSF对照射后小鼠的造血功能恢复有一定改善作用,联合使用效果优于单独使用.
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重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)抑制大鼠脑卒中后的谷氨酸毒性和IL-1β反应
目的:研究重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对急性脑卒中大鼠脑梗死区域内谷氨酸、IL-1β和IL-6浓度的影响.方法:采用线拴大脑中动脉阻塞(MCA0)法制备急性脑卒中模型,90 min后再灌注.线栓封堵大脑中动脉后,静脉一次性注射rhG-CSF(60 mg·kg-1,治疗组,n=10)或0.3 mL生理氯化钠溶液(对照组,n=8).采用微透析法,检测纹状体内谷氨酸浓度;ELISA法分别检测脑组织和血清的IL-1β和IL-6含量.结果:脑卒中发生后0.5～3 h,治疗组梗死侧纹状体内谷氨酸浓度明显低于对照组梗死侧(P＜0.01);脑卒中后6 h,治疗组梗死侧脑组织内IL-1β浓度明显低于对照组[(11.38±5.54)vs(21.15±9.57)ng·g-1,P＜0.01];治疗组血浆内的IL-1p浓度也明显低于对照组[(74.26±26.47)vs(122.88±29.10)ng·mL-1,P＜0.01].脑卒中6 h后,两组大鼠的血浆和脑组织中均未检测到IL-6.结论:rhG-CSF能明显抑制脑卒中后的谷氨酸毒性和IL-1β反应.
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小儿急性白血病化疗中应用重组人粒细胞集落刺激因子临床观察
目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)隔日皮下注射,在小儿急性白血病(AL)强化疗后的临床作用.方法:12例小儿(AL)接受强化疗后白细胞≤1.0×109/L(骨髓进入抑制期)时,用rhG-CSF每次2～5μg/kg,隔日三角肌处皮下注射,查外周血:白细胞≥2.5×109/L时停止使用.并记录白细胞减低持续时间,患儿感染情况,同时对外周血出现幼稚细胞者,2周后骨髓涂片了解骨髓情况.选用既往相同年龄、相同类型AL患儿,用相同化疗方案,未使用rhG-CSF,同样例数作对照.结果:治疗组白细胞≥2.5×109/L需天数(6±2.7天),比对照组(13±3天)明显缩短(t=6.06,P＜0.01).且使用rhG-CSF组出现较轻感染或不感染.多数能安全渡过骨髓抑制期,而对照组多感染重或多重感染,抗感染治疗疗效差.6例患者使用rhG-CSF后外周血出现幼稚细胞,但停药2周后复查骨髓仍处于缓解期.结论:隔日皮下注射rhG-CSF每次2～5μg/kg,可明显缩短小儿AL强化疗后骨髓抑制期,有效防止和控制继发感染.
关键词： 白血病 急性 骨髓抑制期 重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF) -
聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子防治肺癌多程化疗 后中性粒细胞减少的临床疗效观察
目的 比较聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)和重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)防治晚期肺癌多程化疗后重度中性粒细胞减少的疗效和安全性.方法 40例晚期肺癌患者,均经过2程及以上化疗后出现过中性粒细胞减少,随机分为2组.观察组化疗结束24 h后皮下注射PEG-rhG-CSF一次;对照组化疗结束24 h后皮下注射rhG-CS,1次·d-1,直至外周血中性粒细胞(ANC)降至低点后连续2次检查ANC≥2.0×109·L-1.结果 观察组较对照组重度中性粒细胞减少发生率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);两组患者近期疗效相似;外周血ANC动态变化观察组第2个高峰ANC水平明显低于对照组,且波峰更低平;两组患者骨骼肌肉疼痛发生率差异有统计学意义(P<0.05);余不良反应发生率相似.结论 PEG-rhG-CSF防治肺癌多程化疗后重度中性粒细胞减少的疗效更好、安全性更高,且整个化疗周期只需给药一次,值得临床推广.
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rhG-CSF和间充质干细胞移植治疗心肌梗死的比较研究
目的 比较分析rhG-CSF和MSCs移植对梗死心肌的修复作用,并分析其可能作用机制.方法 选择纯种大白兔45只(死亡10只),分为rhG-CSF组(n=12)、MSCs移植组(n=10)和对照组(n=13),于心肌梗死后30d,分别检测其心功能、梗死心肌的形态学以及新生毛细血管密度.结果 与对照组相比,rhG-CSF组和MSCs移植左心室收缩末期内径、舒张末期内径明显降低,心功能提高,室壁厚度增加,心肌梗死面积缩小,而梗死区和梗死边缘区新生毛细血管密度增加,具有统计学意义.结论 rhG-CSF应用和MSCS移植治疗兔心肌梗死,可明显改善心功能,缩小梗死面积,增加梗死心肌新生毛细血管密度.
