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用噬菌体展示技术筛选幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白基因结合蛋白的研究
目的 筛选幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白(CagA)基因结合蛋白,探索CagA致病机理. 方法 应用噬菌体展示技术,以幽门螺杆菌CagA基因片段作为固相筛选分子,对噬菌体人胃细胞cDNA文库进行4轮"吸附-洗脱-扩增"富集,噬斑裂解液PCR扩增后,进行DNA序列分析和同源性生物信息学搜索,确定编码结合蛋白的种类. 结果 噬菌体经富集后,筛选出36个阳性克隆,构建了克隆载体.序列测定后经过同源性搜索,确定幽门螺杆菌CagA基因共编码核纤层蛋白B1和胰岛素样生长因子结合蛋白2两种已知蛋白. 结论 用噬菌体人胃cDNA文库筛选得到幽门螺杆菌CagA基因DNA结合蛋白,为研究CagA致病机理,幽门螺杆菌疫苗的研制和治疗等提供依据.
关键词： 噬菌体展示 幽门螺杆菌 细胞毒素相关蛋白(CagA) 结合蛋白 -
三联不同疗程清除儿童Ⅰ型幽门螺杆菌感染的疗效观察
目的探讨奥美拉唑(洛赛克)、克拉霉素、甲硝唑三联1周和2周疗法清除儿童I型幽门螺杆菌(Helicabocter Pylori ,Hp)感染的疗效.方法经免疫印迹技术检测证实为I型 Hp感染的再发性腹痛儿童61例,随机分为A组27例,B组34例,A组接受洛赛克、克拉霉素、甲硝唑三联1周治疗,B组接受洛赛克、克拉霉素、甲硝唑三联2周治疗,均停药一月后复查细胞毒素相关蛋白(CagA)抗体、空泡毒素(VacA)抗体.结果 A组和B组临床总有率分别为85.18%和86.36%,Hp根除率分别为88.89%和90.9%.结论洛赛克、克拉霉素、甲硝唑三联1周和2周疗法清除儿童I型幽门螺杆菌感染根除率高,疗效相当.
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应用SAS软件分析CagA蛋白序列可变区的多态性
目的:应用SAS软件进行数据挖掘,系统阐明幽门螺杆菌(H.pylori)CagA序列多态性及其特性.方法:采用SAS软件数据加工整理技术与生物信息学软件序列分析比对相结合的方法,对NCBI、swiss_prot/tremble、DDBJ三大蛋白数据库有关CagA蛋白序列数据进行整理,建立含97条完整序列及268条3'端部分序列的数据仓库,并对其进行多态性分析.结果:通过SAS程序对数据的整理加工后观察、统计分析,明确了可变区的位置及长度,准确地得出了EPIYA基序的重复频率、多态性及概率分布,EPIYA基序间隔序列的种类、特征及频度.CagA蛋白氨基酸序列长短不等主要是由于可变区的变化引起,可变区平均长度115.76±27.38aa.365例H.pylori菌株CagA可变区内EPIYA基序平均重复3.28±0.72次,少1次,多7次.EPIYA有9种突变型,占总数的7.18%.2个EPIYA基序之间的间隔序列,主要有7种,其中R3C、R4C中"FPLKRHDKVDELIKVG"及"TIDDLGGP"是西方株的特征基序,R3D中的"KIASAGKGVGGFSGAG",R4D中的"FPLRRSAAVNDLSKVG"及"TIDFDEAN"则是东亚株特征序列.EPIYA及其间隔序列不同组合构成CagA可变区17种不同的类型.在东亚株中EPIYA基序重复次数及EPIYA-D位点数明显少于西方株,EPIYA-A、EPIYA-B位点则多于西方株.结论:应用SAS软件可有效地对CagA蛋白可变区的多态性分析,从整体上把握了CagA可变区的序列特征,较以往的描述更详细、系统、合理.由于CagA序列可变区多态性的特点及与细胞毒性的关系,在此基础上进一步的研究可能揭示更多的分子生物学机制.
关键词： 细胞毒素相关蛋白(CagA) 多态性 数据挖掘 -
幽门螺杆菌毒力因子CagA和VacA多样性与胃部疾病关系研究进展
幽门螺杆菌(HP)是高感染率的慢性感染性致病菌,全球50％以上的人口感染该菌.大量研究表明,HP与消化性溃疡、慢性胃炎、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)及胃癌的发生发展密切相关.近些年,关于HP毒力因子致病性的研究取得了一定进展,此文就HP重要的毒力因子细胞毒素相关蛋白(CagA)和空泡细胞毒素(VacA)作一综述.
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幽门螺杆菌菌型与消化性溃疡的相关性研究
目的探讨能产生细胞毒素相关蛋白 (CagA)与细胞空泡毒素 (VacA)的幽门螺杆菌 (HP)与消化性溃疡的关系.方法用免疫印迹法检测分析经尿素酶及组织学 Giemsa染色证实 HP阳性的血清标本共 117份,其中慢性胃炎 68份,消化性溃疡 49份.观察两种疾病中 CagA与 VacA阳性的 HP检测结果.结果慢性胃炎组、消化性溃疡组的 CagA与 VacA阳性的 HP感染率分别为 35.29% (24/68)和 61.12% (30/49),差异有显著性 (P < 0.01).结论具有 CagA与 VacA的 HP的菌株与消化性溃疡发病密切相关.
