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PC-12神经元作为海分枝杆菌感染宿主的实验研究
目的 研究海分枝杆菌感染PC-12神经元细胞的感染潜能及其诱导促炎性细胞因子表达的免疫特性. 方法 用海分枝杆菌感染神经营养因子(nerve growth factor,NGF)诱导分化的PC-12神经元,采用激光共聚焦显微镜观察细菌在PC-12神经元细胞内的定位分布,并计数细菌的菌落形成单位(CFU)以观察其在PC-12神经元细胞内的增殖情况;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白介素(Interleukin)-1β、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和环氧合酶(cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA及蛋白的表达情况. 结果 海分枝杆菌感染PC-12细胞后,激光共聚焦显微镜观察细菌侵入PC-12神经元胞浆内并进行增殖.当细菌以MOI=20感染神经元细胞时,感染后24 h与感染后6 h相比,细菌在细胞内增殖了约25倍.同时海分枝杆菌感染后6h即可诱导促炎性分子TNF-α、IL-1β、iNOS和COX-2的mRNA表达明显增加,感染24h后TNF-α 、IL-1β、iNOS和COX-2的蛋白表达也明显增加. 结论 PC-12能够作为海分枝杆菌感染的宿主细胞,并引起促炎相关因子的分泌,从而促进炎症反应.
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两种博尔纳病病毒株持续感染PC-12细胞模型的建立
目的 构建两种博尔纳病病毒株持续感染的PC-12细胞模型,为研究博尔纳病病毒感染致病机制及比较两种病毒株致病特点的差别提供工具.方法 将BDV Strain V株和Hu株分别感染PC-12细胞系,并进行传代培养,后通过Real time FQRT-PCR、Western blot、间接免疫荧光方法进行病毒核酸和蛋白的检测.结果 在培养传代6代后,两种病毒株感染的PC-12细胞均可检测到BDV核酸及蛋白.结论 BDV Strain V株和Hu株均可在PC-12细胞中复制和表达,两种博尔纳病病毒株持续感染PC-12细胞模型构建成功.
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六味地黄丸抑制H2O2诱导的PC－12细胞凋亡的作用机制
目的：探讨经典名方六味地黄丸对H2 O2所致PC12细胞凋亡时bax、caspase－8和bcl－2基因和蛋白表达的调控作用。方法把大鼠肾上腺嗜铬瘤（ PC－12）细胞分为4组：对照组、模型组、六味地黄丸组、维生素（ Vit） E组。待细胞培养24 h贴壁后吸去培养液，对照组和模型组都加入含10％大鼠血清培养液，六味地黄丸组和VitE组分别加入含10％六味地黄丸大鼠血清培养液和含VitE的培养液，预保护24 h后，除对照组之外的各组加入H2 O2终浓度为200μmol／L，对照组加入等量的培养液，继续孵育24 h后离心收集细胞，提取总RNA和蛋白。应用RT－PCR和Western印迹方法分别测定bax、caspase－8、bcl－2基因和蛋白质表达的变化。结果六味地黄丸能下调bax、caspase－3基因和蛋白的表达，对 bcl－2基因和蛋白表达有上调作用。结论六味地黄丸能通过有效降低bax、caspase－8基因和蛋白表达，提高bcl－2的表达，抑制、阻止PC－12细胞凋亡，促进细胞存活。
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碲化镉量子点对PC-12细胞的细胞毒性研究
目的:探讨碲化镉(CdTe)量子点的生物安全性.方法:以水热法制备的、巯基丁二酸(MSA)包被的碲化镉(CdTe)量子点为研究对象,作用于体外培养的鼠神经元细胞(PC-12).实验设立对照组和不同浓度CdTe QDs作用组.CdTe QDs作用于细胞后,采用倒置荧光显微镜分别观察量子点作用下的细胞形态与细胞对量子点的摄取情况;使用alamarBlue检测CdTe QDs对细胞存活率的影响;Hoechst 33342单染法观察CdTe QDs对PC-12细胞核形态的影响;Annexin Ⅴ-FITC单染检测CdTe QDs对PC-12细胞凋亡的影响.结果:CdTe量子点作用后,低浓度实验组细胞变化不明显,高浓度实验组中的细胞的形态发生改变,引起细胞肿胀变圆,细胞数量减少,存活率显著下降;在染色下可见明显的细胞凋亡.结论:量子点与细胞接触后会通过胞吞途径进入细胞,汇聚于多种细胞器,对细胞器的功能造成损害,进而引发多种途径的细胞凋亡机制并引发细胞死亡.
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含地黄饮子脑脊液对PC-12细胞氧化应激的影响
目的 通过建立Aβ损伤的PC12细胞模型,分析含地黄饮子脑脊液对PC-12细胞氧化应激的影响.方法 将PC12细胞离体培养,待细胞进入对数生长期后吸弃培养液,分别加入空白培养液10％、正常脑脊液10％、含安理申脑脊液10％、含地黄饮子脑脊液5％、含地黄饮子脑脊液10％、含地黄饮子脑脊液20％,并加培养液补至等量,即成为:空白组、模型组、安理申组、地黄饮子低剂量组、地黄饮子中剂量组、地黄饮子高剂量组,37℃孵育2h.除空白组外各组均加入4μl经老化处理终浓度为10μ mol/L的Aβ25-35,建立AD细胞模型,空白组则加入4μl空白培养液,继续37℃孵育24h.然后收集培养液,离心细胞.检测各组PC12细胞培养液中MDA、SOD、CAT、GSH-Px的含量.结果 地黄饮子能降低Aβ25-35损伤PC-12细胞培养液中的MDA含量,提高PC-12细胞培养液中SOD的活性、提高CAT、GSH-Px的含量即抗氧化酶活性,提高自由基清除能力,减少自由基对PC-12细胞的损伤.结论 含地黄饮子脑脊液可能通过改善Aβ25-35损伤的PC-12细胞状态,减轻脂质过氧化反应,提高降低的抗氧化酶活性,清除自由基,从而起到保护细胞的作用.
