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合成七肽在牛种布鲁氏菌RB51株侵染人单核细胞系THP-1过程中对MAPK通路的影响
目的 观察七肽LPAAQKT在布鲁氏菌侵染人单核细胞系THP-1过程中对MAPK通路的影响. 方法 通过MTT法检测合成七肽对THP-1的毒性;采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测七肽对感染细胞凋亡的影响;通过CFU计数分析七肽对感染细胞内细菌数量的影响;采用qRT-PCR和Western blot检测牛种布鲁氏菌RB51感染THP-1不同阶段MAPK通路中ERK1/2、JNK1/2、P38的mRNA和蛋白活化及表达情况. 结果 合成七肽对THP-1无毒性作用;流式细胞术检测七肽对THP-1细胞凋亡作用的影响为:感染复数50∶1组4h时对细胞凋亡有促进作用,48 h时对细胞凋亡有抑制作用;CFU计数显示在感染前预先加入七肽导致THP-1细胞内布鲁氏菌数少于未加七肽组;qRT-PCR和磷酸化Western blot显示,感染4h时,七肽降低感染组中erk1的转录与蛋白活化,感染48 h时七肽降低jnk1/2的转录与蛋白活化. 结论 环化七肽CLPAAQKTC参与感染细胞的凋亡过程,因此有望用于布鲁氏菌病治疗药物的研发.
关键词： 布鲁氏菌RB51 THP-1 七肽 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) 细胞凋亡 -
电磁辐射对大鼠海马MAPK信号通路的影响
目的观察电磁辐射对大鼠海马神经细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族基因及蛋白质表达水平的影响.方法以65 mW/cm2电磁波急性辐照大鼠20 min,采用RT-PCR检测细胞外的调节蛋白激酶1(ERK1)、C-Jun氨基未端激酶1(JNK1)、P38 MAPK mRNA表达,采用蛋白质免疫印迹方法检测ERK1、JNK1、P38 MAPK蛋白质表达.结果电磁波辐照后大鼠海马ERK1与JNK1的mRNA表达及蛋白质表达均明显增加,ERK1的高表达持续至辐照后12 h,JNK1持续至辐照后3,24 h后两者均不同程度低于对照水平,辐照后P38 MAPK的mRNA及蛋白质表达变化不明显.结论电磁辐射可在基因转录和蛋白质表达水平对ERK和JNK 2条信号转导通路产生影响,对P38MAPK的影响不明显.ERK和JNK两条信号转导通咱可能参与了电磁辐射导致的中枢神经损伤.
关键词： 电磁辐射 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) 信号转导 海马 -
草苁蓉环烯醚萜苷对肝癌抑制作用
目的 探讨草苁蓉环烯醚萜苷(IGBR)对二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌细胞凋亡的影响及其可能作用机制.方法Wistar雄性大鼠随机分为对照组和模型组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组、IGBR组,除对照组外,其余大鼠第1天给予腹腔注射DEN 200 mg/kg 1次,自由饮用0.05 ％ 的DEN水溶液;5-FU组大鼠腹腔注射25 mg/kg 5-FU,每周3次;IGBR组大鼠灌胃500 mg/kg IGBR每日1次.实验第12、20、28周末分批处死动物,TUNEL法检测肝细胞凋亡,Western blot法检测肝组织中Bax、Bcl-2和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路相关蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组大鼠肝细胞凋亡指数[(12.3 ± 0.4)％]明显升高;与模型组比较,5-FU组与IGBR组大鼠肝细胞凋亡指数[分别为(22.3 ± 0.2)％、(22.2 ± 0.1)％]明显升高(P＜0.05),5-FU组与IGBR组之间差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组比较,模型组大鼠肝组织中p-ERK、p-Akt表达水平下降、p-JNK、 p-p38表达水平升高,ERK、p38、JNK、Akt表达无显明变化;与模型组比较,5-FU组与IGBR组大鼠肝组织中Bcl-2和p-ERK、p-Akt表达水平下降,Bax和p-JNK、p-p38表达水平升高.结论IGBR可通过MAPK、PI3K/Akt信号通路,调节Bax和Bcl-2表达,诱发DEN大鼠肝癌细胞凋亡.
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MAPK抑制剂对镉诱导凋亡基因表达影响
目的 观察丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂PD98059对氯化镉(CdCl2)诱导大鼠肾上皮细胞(NRX)凋亡基因Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达的影响.方法 应用流式细胞仪测定CdCl2染毒6 h的NRK细胞凋亡作用;用MAPK抑制剂PD98059预先处理NRK细胞1 h后,用不同浓度镉染毒,运用实时荧光定量PCR技术,检测NRK肾细胞内凋亡基因Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达水平.结果 NRK细胞的凋亡率与CdCl2染毒存在剂量-效应关系;2.5,5,10 μmol/L镉染毒使Bcl-2 mR.NA的表达水平分别下降至对照组的72%,53%和37%,而Caspase-3 mRNA表达水平上升为对照组的125%,153%和175%.在细胞培养基中预先加入PD98059然后用镉染毒,PD98059可明显阻止镉引起的Bcl-2 mRNA表达水平下降以及Caspase-3 mRNA表达水平升高.结论 MAPK抑制剂PD98059对镉引起凋亡基因Bcl-2和Caspase-3的表达水平改变具有明显干预作用,提示MAPK信号调节可能参与镉诱导的细胞凋亡过程.
关键词： 镉 肾上皮细胞(NRK) 细胞凋亡 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) -
莱菔硫烷对膀胱癌细胞增殖抑制作用
目的 研究丝裂原活化蛋白激酶( MAPKs)和磷脂酰肌醇激酶(PI3K)信号途径在莱菔硫烷(sulforaphane,SEN)抑制膀胱癌细胞增殖中的作用.方法 噻唑蓝(MTT)法测定膀胱癌细胞的增殖作用,用实时定量PCR方法(real time- PCR)测定对环氧化酶(COX-2)mRNA的影响.结果 5～20 μmol/L莱菔硫烷能明显抑制膀胱癌细胞的体外增殖、COX-2 mRNA表达；SB202190或LY294002预处理T24细胞,能明显降低莱菔硫烷对T24细胞增殖的抑制作用,提高细胞存活率；SB202190预处理T24细胞1h能完全阻断莱菔硫烷对COX-2mRNA的抑制作用,而LY294002不影响莱菔硫烷对COX-2mRNA的抑制作用.结论 莱菔硫烷可能是通过活化p38激酶途径和PI3K激酶途径抑制膀胱癌细胞生长,p38激酶信号途径在SFN抑制COX-2mRNA中起关键作用.
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坎地沙坦抗高糖诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖作用
目的 探讨坎地沙坦(Cand)对高糖诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞株A7r5增殖的影响及作用机制.方法 体外培养A7r5细胞,分为对照组、高糖组、Cand(低、中、高)剂量组;通过CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测p-c-Raf、p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平.结果 与对照组比较,高糖组A7r5细胞增殖活性明显增强,细胞周期S期比例[(30.503±1.521)％]明显增加(P＜0.01),A7r5细胞内p-c-Raf、p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平[分别为(1.060 ±0.087)、(1.155±0.064)、(1.924±0.065)]明显升高(P＜0.05);与高糖组比较,Cand高剂量组A7r5细胞增殖活性下降,细胞周期S期比例[(21.677±1.690)％]下降(P＜0.01),A7r5细胞内p-c-Raf、p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平[分别为(0.658±0.039)、(0.821±0.049)、(0.795±0.028)明显下降(P＜0.01).结论 坎地沙坦对高糖诱导的A7r5细胞增殖具有抑制作用,其机制可能与抑制细胞周期及信号传导通路上3种蛋白磷酸化有关.
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六味地黄丸对椎间盘体外退变模型髓核细胞MAPK信号级联的影响
背景:JNKs和p38作为丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族中重要的成员,对细胞增殖、分化、转化及凋亡起着至关重要的作用.目的:观察六味地黄丸对兔椎间盘体外退变模型髓核细胞MAPK信号级联的影响.方法:将100个带终板软骨的椎间盘随机分为空白对照组、肿瘤坏死因子α组、p38-JNK/SAPK阻断组、六味地黄丸组、肿瘤坏死因子α+含六味地黄丸组,每组20个.肿瘤坏死因子α组培养液中含10 mg/L肿瘤坏死因子α2μL;p38-JNK/SAPK阻断组培养液中含p38MAPK特异性阻断剂SB203580,JNK特异性阻断剂SP600125各20μmol/L 10μL,10 mg/L肿瘤坏死因子α2μL;六味地黄丸组培养液中含体积分数为10%六味地黄丸血清;肿瘤坏死因子α+六味地黄丸组培养液中含10 mg/L肿瘤坏死因子α2μL,体积分数为10%六味地黄丸血清,分别于培养的第2,4,8,14天收集标本待测.结果与结论:RT-PCR、Western Blot检测显示,随着培养时间的延长,髓核细胞JNK及P38通路的mRNA含量、蛋白表达量明显逐步升高,而含六味地黄丸血清可以延缓这一进程,提示六味地黄丸可以通过一定程度阻滞JNK及P38通路的信号表达,延缓椎间盘退变进程,起到保护椎间盘的作用.
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MAPK级联信号通路与长时程增强
长时程增强(long-term potentiation,LTP)被认为是与学习记忆密切相关的神经突触可塑性的生物学基础,多种信号通路参与了LTP的诱导与维持.丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)级联信号通路是介导细胞反应的重要信号系统,是细胞外信号从细胞表面传导到细胞核内部的重要传递途径,在细胞的增殖、分化和调亡过程中发挥重要作用.研究表明,MAPK的上游调节物质和下游作用分子在神经元中广泛存在,MAPK级联信号通路通过磷酸化神经元参与LTP诱导与维持的多种受体和酶,进而发挥对LTP的调节作用,影响神经突触可塑性.该文综述了细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、c-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和p38 3条MAPK通路对LTP的调节作用.
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MAPK信号调节通路及其在细胞凋亡中的研究进展
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是脊椎动物体内广泛存在的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,其家族主要成员有:MAPKKK、MAPKK和MAPK三级保守的蛋白激酶,通过三级级联反应激活下游转录因子,传递细胞外部多种类型刺激至细胞核内的信号通路,与细胞的增殖、分化、转化、炎症以及凋亡等多种细胞反应以及机体多种生理病理过程密切相关[1].
关键词： 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) 信号转导 细胞凋亡 进展 -
甜菜碱调控丝裂原活化蛋白激酶通路抑制大鼠急性心肌缺血的作用
目的:探讨甜菜碱对异丙肾上腺素(ISO)诱导的大鼠急性缺血性心肌损伤的保护作用及其对MAPK通路的影响.方法:SD雄性大鼠皮下注射ISO(85 mg·kg-1·d-1,qd,连续2 d)建立急性心肌缺血模型,研究甜菜碱(100,200,400 mg·kg-1·d-1)灌胃给药40 d对缺血性心肌病理结构、抗氧化酶活力、脂质过氧化物含量及MAPK通路相关蛋白表达的影响.结果:甜菜碱(100,200,400 mg·kg-1 ·d-1)对急性心肌缺血心肌病理结构的损伤具有保护作用,可升高ISO致急性心肌缺血大鼠心肌组织中T-AOC、SOD、GSH-PX的活力,并相应降低脂质过氧化物MDA的含量.甜菜碱(400 mg· kg-1·d-1)显著降低p-ERK1/2蛋白的表达,并增加p-JNK和p-p38 MAPK蛋白的表达(P＜0.01).单用甜菜碱(400 mg·kg-1 ·d-1)除可降低ERK1/2的表达外,对心肌组织结构、抗氧化物酶活性及脂质过氧化物含量及其他MAPK通路蛋白表达均无影响.结论:大剂量甜菜碱对异丙肾上腺素致大鼠急性心肌缺血性损伤的保护作用可能与MAPK通路有关.
关键词： 甜菜碱 心肌缺血 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) 异丙肾上腺素 抗氧化 -
黄芩苷及MAPK通路在子痫前期血管内皮保护与损伤关系中的研究概况
子痫前期(PE)属于妊娠期高血压病分类中重要的一类,指出现在妊娠20周后的高血压、蛋白尿,轻度子痫前期可伴有上腹不适、头痛等症状,重度子痫前期患者出现持续性头痛或其他脑神经或视觉障碍及上腹部不适,心脏、脑、肝肾损伤,血小板减少,凝血功能,胎盘早剥,胎儿生长受限,早产,新生儿发生明显的血象改变.目前认为子痫前期的发病原因与滋养细胞缺氧缺血、细胞凋亡调节异常、遗传基因的调控、氧化应激及血管活性物质失衡、免疫调节异常、营养因素如钙、维生素D等缺乏有关.子痫前期疾病的发病过程中,在缺氧的情况下,炎性因子如IL-6、IL-10、TNF-α等分泌增加.加剧单核细胞、中性粒细胞与内皮细胞之间的黏附作用,加重内皮细胞的损伤.
关键词： 子痫前期 黄芩苷 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) 综述 学术性 -
六味地黄丸对兔椎间盘退变模型髓核细胞p38MAPK信号级联JNK通路的影响
目的:观察六味地黄丸对兔椎间盘退变模型髓核细胞JNK与p38MAPK信号级联的影响.方法:选取6月龄清洁级新西兰兔80只,随机分为空白组、假手术组、模型组、六味地黄丸组,每组20只.模型组、六味地黄丸组建立椎间盘退变动物模型,六味地黄丸组予六味地黄丸混悬液灌胃,空白组、假手术组、模型组灌以等量生理盐水灌胃.于后1次灌胃后4h分2周、4周、6周、8周分批次处死动物,留取L4/5,L5/6椎间盘标本或去除椎旁软组织、保留韧带结构的脊柱标本,冻存待测.结果:RT-PCR和Western Blot检测结果表明,六味地黄丸组与模型组兔髓核细胞JM、p38MAPK的mRNA含量和蛋白表达明显高于假手术组与空白组,差异有统计学意(P＜0.05);假手术组与空白组JNK、P38MAPK的mRNA含量和蛋白表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05);六味地黄丸组JNK、P38MAPK的mRNA含量和蛋白表达明显低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:六味地黄丸能抑制JNK与p38MAPK通路的全面激活,保护髓核细胞,使细胞稳定,对椎间盘退变有明显的防治作用;六味地黄丸可能发挥类JNK与P38MAPK抑制剂作用,调节JNK与p38MAPK的表达,减缓了髓核细胞的凋亡,保护了髓核细胞.
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谷氨酰胺抑制早产高氧肺损伤大鼠肺组织的炎症反应及其机制
目的 研究谷氨酰胺对早产高氧肺损伤大鼠肺部炎症反应的影响及机制.方法 制备早产高氧肺损伤大鼠模型,给予谷氨酰胺处理.利用Diff-Quik染色检测大鼠支气管肺泡灌洗液中炎症细胞聚集情况,HE染色观察早产高氧肺损伤大鼠肺组织的炎症变化,TUNEL染色观察早产高氧肺损伤大鼠肺组织的细胞凋亡情况,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blot法检测肺组织中丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1(MKP-1)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)及胞质磷脂酶A2(cPLA2)的磷酸化水平.结果 谷氨酰胺处理可以抑制肺部炎症反应和细胞凋亡,减少IL-1β和TNF-α的表达,促进MKP-1的磷酸化,抑制MAPK的激活和cPLA2磷酸化,减轻肺部炎症,缓解早产高氧大鼠肺组织肺炎症损伤.结论 谷氨酰胺通过调节MKP-1/MAPK信号通路抑制早产高氧肺损伤大鼠肺部炎症反应.
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敲低Raf激酶抑制蛋白促进LX-2人肝星状细胞增殖
目的 研究Raf激酶抑制蛋白(RKIP)在LX-2人肝星状细胞增殖中作用.方法 将RKIP小干扰RNA (siRNA-RKIP)重组质粒转染至LX-2细胞,培养5d,并筛选出稳定转染的细胞.MTT法检测沉默RKIP后LX-2细胞的增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期;实时定量PCR检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和1型胶原蛋白(Col1) mRNA的表达.Western blot法检测RKIP、α-SMA、Col1及胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶(ERK/MAPK)信号通路相关蛋白的表达水平.结果 与空白对照组相比,RKIP低表达明显诱导LX-2细胞增殖,抑制细胞凋亡,增加G2期细胞比例,提高Col1、α-SMA mRNA和蛋白表达.此外,RKIP的沉默明显提高ERK/MAPK磷酸化水平.结论 敲低RKIP的水平促进LX-2细胞的增殖,其机制与激活ERK/MAPK信号通路有关.
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IL-1β激活p38 MAPK通路促进人颞下颌关节滑液间充质干细胞分泌IL-6和IL-8
目的: 探讨p38 MAPK 信号通路在IL-1β 介导下人颞下颌关节滑液间充质干细胞(synovial fluid derived mesenchymal stem cells,SFMSCs) 炎性因子分泌中的作用.方法: 体外培养SFMSCs,分为对照组和IL-1β(10 ng/ml 2 h) 处理组,Western blot检测p38 MAPK 蛋白表达,RT-PCR 和炎症细胞因子CBA 检测对照组、IL-1β 处理组和p38 MAPK 抑制剂组(SB-203580 10 μmol/L、1 h 后加入IL-1β 10 ng/ml 2 h) hSFMSCs 及培养基中IL-6 和IL-8 的表达和分泌.结果: IL-1β 处理组SFMSCs p-p38MAPK 蛋白表达、IL-6 和IL-8 的基因表达及分泌量均明显增加,而p38 MAPK 抑制剂组则均明显减少.结论: p38 MAPK 信号通路参与炎性微环境下人SFMSCs 的炎性分泌.
关键词： 颞下颌关节 滑液间充质干细胞 细胞因子 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) -
MAPK在葡萄糖及AngⅡ致血管平滑肌细胞增殖反应中的作用
目的: 研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径在葡萄糖(GS)和/或血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导大鼠动脉平滑肌细胞促增殖中的作用及其可能的调控机制. 方法: 实验以平滑肌细胞蛋白合成速率和蛋白含量为平滑肌细胞增殖的指标,以平滑肌细胞3H-亮氨酸掺入率表示细胞蛋白质合成速率,通过3H-胸苷(3H-TdR)反映平滑肌细胞DNA的代谢及细胞增殖情况;并通过给予PD098059及高浓度葡萄糖(HG)预处理,观察它们对细胞蛋白合成、DNA代谢及细胞增殖的影响. 结果: ① AngⅡ(10-7 mol/L)处理平滑肌细胞,3H-胸苷掺入率明显增高;HG (25×10-3 mol/L)处理平滑肌细胞,3H-胸苷掺入率明显增高;AngⅡ+HG处理平滑肌细胞3H-胸苷掺入率显著增高. ② AngⅡ增加3H-胸苷掺入的作用可明显被PD098059所抑制;AngⅡ+HG增高3H-胸苷掺入的作用也可被PD098059所抑制. ③ AngⅡ(10-7 mol/L)处理平滑肌细胞,3H-亮氨酸掺入率明显增高;HG (25×10-3 mol/L)处理平滑肌细胞,3H-亮氨酸掺入率增加;AngⅡ+HG处理平滑肌细胞3H-亮氨酸掺入率显著增加. ④ AngⅡ增加3H-亮氨酸掺入的作用可部分被PD098059所抑制;AngⅡ+HG增加3H-亮氨酸掺入的作用可显著被PD098059所抑制. 结论: 应用MAPK的特异性抑制剂PD098059抑制血管平滑肌细胞的增殖,证明MAPK激活在GS和/或AngⅡ导致平滑肌细胞增殖反应中有重要作用.
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子宫内膜异位症有关信号通路的研究进展
子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)在生育年龄妇女中多发且发病率呈上升趋势,但其具体机制未完全明确,近年国内外学者研究表明EMS中存在的多种细胞凋亡/存活信号转导通路的异常,这些通路的异常启动及其复杂的相互作用会导致异位内膜组织的异常增殖、分化、侵入性增强及炎症反应,促进异位病灶形成,引起不孕、宫腔粘连、痛经等,对患者身心及经济带来极大挑战.因此,进一步研究EMS有关的信号通路对其所致的不孕症的临床治疗提供可靠依据,本文就EMS有关的MAPs通路、PI3K/AKT(PKB)通路、腺上皮-间质相互作用通路、Rho/ROCK通路的研究进展作一综述.
