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四倍体胚胎发育阶段对胚胎干细胞嵌合体小鼠制备的影响
目的 探讨四倍体胚胎发育阶段对胚胎干细胞(ES)嵌合体小鼠制备的影响.方法 通过2-细胞胚胎电融合法制备四倍体胚胎,采用显微注射方法将ES细胞分别注入1-细胞、4-细胞、囊胚3个发育阶段的四倍体胚胎中.所用ES细胞分别为杂交系B6D2F1×129/Sv和近交系C57BL/6J,经胚胎移植和剖腹产以获得ES小鼠.结果 实验表明,2-细胞胚胎电融合率为92.45%,4-细胞胚胎发育率为93.51%,囊胚发育率为90.42%.杂交ES细胞注射四倍体囊胚获得22只ES小鼠,效率显著高于近交系ES细胞以及其他发育阶段的四倍体胚胎,ES小鼠与B6D2F1×129/Sv杂交小鼠毛色一致且具有正常生殖能力.结论 四倍体胚胎的发育阶段显著影响ES小鼠的制备.
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制备嵌合体小鼠实验中ES细胞的处理方法
目的 介绍两种制备嵌合体小鼠实验中ES细胞的处理方法.方法 一种为差速贴壁分离法即消化后的ES细胞接种在明胶包被的平皿中,利用饲养层细胞与ES细胞贴壁速度的不同来分离ES细胞;另一种方法为冰水浴自然沉淀分离法,即消化后的ES细胞移入15ml离心管中冰水浴,利用细胞间自然沉淀的位置不同分离ES细胞.结果 两种方法均可得到足够数量处于未分化状态的ES细胞.结论 这两种方法都可以应用于制备嵌合体小鼠实验中的ES细胞处理.
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抗CD4、CD8单抗诱导异基因骨髓移植嵌合供体小鼠免疫耐受
目的探讨诱导骨髓移植物的免疫耐受.方法通过尾静脉给ICR系小鼠注入抗CD4、CD8单抗和同种异基因昆明系小鼠的骨髓,使之成为嵌合体小鼠.后将该嵌合体小鼠的骨髓移植到宿主体内.结果 ,实验组和对照组的植活皮片中位累计生存率分别为100%和33.33%,经Wilcoxon检验P＜0.05.结论抗CD4、CD8单抗与异基因骨髓细胞的联合应用可诱导供体产生特异性免疫耐受,将该嵌合供体的骨髓移植后可延长受体的生存期.
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来源于胚胎干细胞的嵌合体小鼠自发性肿瘤观察
目的 观察胚胎干细胞(ES细胞)囊胚腔注射的方法 构建嵌合体小鼠自发性肿瘤.方法 连续80周每周观察嵌合体小鼠的肿瘤发生情况,选取同龄相关品系小鼠各10只作为对照组.处死发生肿瘤的小鼠并且病理学检查,提取肿瘤组织的基因组DNA.用PCR方法 检测性别决定区(SRY)基因判断肿瘤的品系来源.结果 13只嵌合体小鼠中有3只(全为雌性)发生自发性肿瘤,分别为腺癌、皮下恶性畸胎瘤、淋巴瘤.肿瘤细胞来源于注射的ES细胞而非受体囊胚.对照组野生型小鼠未见肿瘤发生.结论 ES细胞囊胚腔注射的方法 构建嵌合体小鼠具有较高的自发肿瘤发生率,可作为自发性肿瘤动物模型.
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乙型肝炎病毒感染动物模型研究进展
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染严重影响人类健康.稳定、可靠的HBV感染动物模型对于HBV感染致病机制的研究和干预措施的研发有重要意义.HBV有很强的宿主选择性,长期以来黑猩猩是唯一的HBV感染动物模型,但黑猩猩的使用受到严格的伦理限制.人们尝试了很多方法以建立HBV感染的小型动物模型.树鼩是唯一可被HBV感染的非灵长类动物.与HBV相关的鸭肝炎病毒和土拨鼠肝炎病毒感染模型的应用推动了对HBV复制机制的认识和治疗方法的评价.近年来发展的人-鼠嵌合体模型则使得人们得以利用常规的实验动物开展HBV研究.这些模型存在各自的优缺点,在某些方面可以互补.本文就目前常用的HBV感染动物模型作一概述.
