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SMMC-7721肝癌细胞裸鼠种植瘤的血管内皮细胞生长因子表达
实体瘤生长至肿瘤直径大于1～2*!mm时自身能分泌多种促血管生长因子［1］，其中主要的是血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)，人肿瘤细胞和某些病理情况下的人组织细胞产生和分泌4种VEGF蛋白多糖分子单体，分别是VEGF121、VEGF165、VEGF189、VEGF206，它们的同源二聚体分子能特异地与肿瘤周围血管内皮细胞上的VEGFR结合［2，3］，刺激内皮细胞的有丝分裂，并通过细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的相应变化，从而建立肿瘤的血管网络。本实验的目的是验证SMMC-7721细胞系是否具有分泌VEGF的生物学特性，为下一步用抗VEGF抗体抑制人肝癌裸鼠皮下种植瘤生长的实验研究，提供可供应用的肝癌细胞系。1 材料和方法1.1 动物和材料雄性的BALB/C nu/nu裸小鼠3只(购自上海市肿瘤研究所)，体重(25±2)g。冻存的SMMC-7721肝癌细胞株，RPMI-1640细胞培养液(GibcoBRL)，0.25%胰蛋白酶消化液(GibcoBRL)，单克隆抗VEGF165抗体(mouse anti-human,IgG2b,clone 26503.11,Sigma)，HIGH-SABC试剂盒及DAB显色试剂盒(佰士德公司，武汉)。1.2 细胞培养、肿瘤接种、细胞铺片的制备1.2.1 复苏冻存的SMMC-7721细胞株，用RPMI-1640细胞培养液，25*!mL细胞培养瓶传代培养3～4代以后，再用250*!mL细胞培养瓶扩传培养，待细胞生长至对数生长期，胰酶消化，用细胞培养液制成细胞悬液，调整细胞密度至1×107/mL，每个裸鼠背部取一点皮下种植细胞悬液0.5*!mL。种植1月后杀死动物取瘤，用10%福尔马林固定，石蜡包埋。1.2.2 将清洁的、高压消毒过的盖玻片放在培养皿中，然后向培养皿中滴加RPMI-1640培养液制成的SMMC-7721细胞悬液，置5%的CO2孵箱中，37℃培养，培养至在显微镜下确认盖玻片上的培养细胞已处于对数生长期，吸除细胞培养液，用PBS洗涤玻片2遍，再用95%的酒精固定玻片上的细胞15*!min，室温放置晾干后，置-30*!℃冰箱中保存备用。
