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脑衰蛋白反应调节蛋白-2参与低氧预适应减轻小鼠脑缺血损伤
目的 研究参与低氧预适应(HPC)的经典型蛋白激酶CβⅡ(cPKCβⅡ)相互作用的脑衰蛋白反应调节蛋白-2(CRMP-2)对缺血脑是否有保护作用.方法 成年雄性BALB/c小鼠随机分为常氧(Nor)、HPC、常氧假手术(Nor+sham)、HPC假手术(HPC+sham)、常氧缺血(Nor+I)和HPC缺血(HPC+I)等6组(每组n=6).应用小鼠整体HPC和脑中动脉梗死(MCAO)致脑局部缺血模型,结合免疫沉淀、双向凝胶电泳和质谱等技术,分离和鉴定与cPKCβⅡ相互作用蛋白;利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blot)技术,分析CRMP-2磷酸化和蛋白降解水平在脑HPC和缺血中的变化.结果 与Nor组比,HPC鼠脑皮层组织内有10种与cPKCβⅡ相互作用蛋白的表达发生了明显变化,其中CRMP-2在膜相关蛋白组分中的表达量升高,而在胞质蛋白组分中的表达量降低.在脑缺血模型中,与Nor+Sham组相比,Nor+I组小鼠脑皮层缺血核心区(Ic)CRMP-2磷酸化水平明显降低(P＜0.05,n=6);与Nor+I组相比,HPC+I组小鼠脑皮层Ic区内CRMP-2磷酸化水平明显增高(P＜0.05,n=6).脑缺血可导致CRMP-2发生水解并伴随着大量55 ku水解片段(BDP)的出现,但与Nor+I组相比,HPC+I组小鼠脑皮层缺血半影区(P)内CRMP-2水解片段减少,水解率明显降低(P＜0.05,n=6).结论 CRMP-2参与了HPC缓解小鼠脑缺血Ic区内CRMP-2磷酸化水平的降低和减少P区内CRMP-2水解片段从而减轻缺血脑组织的损伤.
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低氧肺动脉高压大鼠蛋白激酶CβⅡ蛋白表达及膜转位水平的变化
目的 建立慢性低氧性肺动脉高压大鼠模型并初步探讨蛋白基酶CβⅡ(PKCβⅡ)在慢性低氧性肺动脉高压的发生发展过程中所起的作用.方法 建立慢性常压低氧肺动脉高压大鼠模型,将清洁级SD大鼠,随机分为正常对照组、低氧1d、3d、7d、14d和21d组,检测大鼠右心室收缩压(right ventricle systolic pressure,RVSP)和右心室肥厚指数(right ventricle hypertrophy index,RVHI),采用HE染色观察肺动脉病理学改变,Western blotting方法检测大鼠肺动脉内PKCβⅡ蛋白表达和膜转位水平的变化.结果 (1)与正常对照组相比,低氧暴露1d、3d、7d、14d、21d后RVSP均明显上升(P＜0.05); RVHI低氧3d、7d、14d、21 d组较正常对照组明显上升(P＜0.05);低氧暴露3、7和21 d组肺动脉病理学改变明显.(2)PKCβⅡ蛋白的表达量在慢性低氧3d、7d、14d和21 d与正常对照组相比明显降低(P＜0.05),慢性低氧3d后PKCβⅡ膜转位水平较正常对照组明显下降(P＜0.05).结论 PKCβⅡ蛋白表达和膜转位水平的下调可能参与了大鼠慢性低氧性肺动脉高压的发生和发展过程.
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术后持续性疼痛大鼠脊髓中PKCβⅡ的表达变化
目的:观察术后持续性疼痛大鼠脊髓中蛋白激酶CβⅡ(protein kinase CβⅡ,PKCβⅡ)表达的变化.方法:将大鼠随机分为对照组、假手术组、术后持续性疼痛组[皮肤肌肉切口牵拉组(skin/muscle incision and retraction,SMIR 组)].对照组不做任何处理;假手术组切割皮肤、肌肉;SMIR组在假手术组基础上牵拉皮肤、肌肉1h.测定各组术后1、3、7、14、21 d时机械性刺激缩爪阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT);用Westorn Blot、免疫荧光染色技术比较术后第7天各组PKCβⅡ的表达情况.结果:SMIR组术后3～21 d MWT显著降低(P＜0.001),比对照组、假手术组降低显著(P＜0.001);和对照组、假手术组比较,术后7 d SMIR组PKCβⅡ蛋白的表达显著增加(P＜0.001).结论:术后持续性疼痛激活大鼠脊髓PKCβⅡ信号.
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蛋白激酶C-βⅡ对SMMC-7721人肝癌细胞增殖的影响
目的 研究蛋-激酶C-βⅡ对SMMC-7721人原发性肝癌细胞增殖的影响.方法 体外基因扩增获得pcDNA3/PKC βⅡ真核表达质粒.脂质体介导pcDNA3/PKCβⅡ基因体外转导人原发性肝癌SMMC-7721细胞,分为实验组(pcDNA3/PKCβⅡ)、对照组(pcDNA3空载体)及空白对照组.细胞计数、MTT法、细胞形态学观察、流式细胞仪等方法检测PKC βⅡ对SMMC-7721人原发性肝癌细胞增殖的影响.结果 细胞生长曲线检测结果显示转导人PKCβⅡ的SMMC-7721细胞数月明显增加;MTT法显示转染PKC βⅡ的人原发性肝癌细胞SMMC-7721的OD值增加(P<0.01);细胞形态学观察实验组SMMC-7721细胞间连接紧密,巨核、双核、多核、奇异型的核也明显增加,核分裂像增多,特别是出现不对称、多极性及顿挫性等病理性核分裂像尤为明显;流式细胞仪检测显示转导PKCβⅡ的SMMC-7721细胞细胞周期中S期细胞明显增多.结论 PKCβⅡ可促进SMMC-7721细胞增殖,其机制可能与促进细胞DNA合成相关.
