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冠心病患者载脂蛋白AV与脂蛋白(a)关系的探讨
血浆脂蛋白中的蛋白质部分称为载脂蛋白,其在血浆脂蛋白代谢中发挥重要功效:促进脂类运输.调节酶活性.引导血浆脂蛋白同细胞表面受体结合;同时对动脉粥样硬化患者的病情也有一定的关系.载脂蛋白AV是一种被发现时间不久的新型载脂蛋白,它和血脂尤其与TG的代谢有着紧密联系.脂蛋白(a)是一种特殊独立的血浆脂蛋白,近些年医学领域的研究中就发现脂蛋白(a)水平的高低和冠心病具有一定的关系.
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人载脂蛋白AV原核表达载体的构建与纯化研究
目的:构建人载脂蛋白AV(apolipoprotein AV,apoAV)的原核载体并表达纯化该蛋白.方法:从人肝癌细胞系HepG2中提取总RNA,以反转录的cDNA第一链为模板,经聚合酶链式反应(PCR)扩增得到含有编码apoAV完整成熟肽段的PCR片段.PCR产物和原核表达载体pET30b经核酸内切酶双切后连接,连接产物经转化至大肠杆菌感受态细胞Top10,挑选克隆测序.重组质粒pET30b-apoAV转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并优化诱导表达条件,重组的apoAV经镍离子螯合树脂纯化获得.结果:经测序证实人apoAV目的基因成功克隆入pET30b原核表达载体中,经过IPTG诱导有约40KD的特异性蛋白表达,与预期大小一致.该蛋白在IPTG诱导下的佳表达时间为5h,佳浓度在31.3 μmol/L.纯化的apoAV纯度在95％以上,产率约为15 mg/L.结论:成功构建人apoAV的原核表达载体,实现了高效表达和纯化,为进一步研究其结构与功能奠定了基础.
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载脂蛋白AV水平及-1131T＞C基因多态性与脑梗死
目的 研究血清载脂蛋白AV(apolipoprotein AV,apoAV)水平及其与甘油三酯的关系在脑梗死患者和正常人群之间的差异,并观察脑梗死急性期血清apoAV水平的动态变化.探讨apoAV基因-1131 T＞C多态性与血清apoAV水平、甘油三酯水平及脑梗死之间的关系.方法 采用病例对照研究,在湖南汉族人群中筛选123例急性期脑梗死患者及113例年龄和性别匹配的健康体检人群为研究对象.应用双抗体夹心ELISA方法测定研究对象血清apoAV水平.采用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测apoAV-1131 T＞C基因型.结果 研究总人群中血清apoAV水平与甘油三酯水平呈负相关(rs=-0.132,P＜0.05).病例组中血清apoAV水平与脑梗死NIHSS评分间有呈正相关的趋势,但无统计学意义(rs =0.161,P＞0.05).ApoAV-1131 T＞C各基因型间血清apoAV水平无显著性差异(均P＞0.05).多因素logistic回归分析显示apoAV-1131C等位基因是脑梗死的独立危险因素(OR =1.897,95％ CI 1.029～3.499,P＜0.05).结论 在湖南汉族非脑梗死人群中,血清apoAV具有降低甘油三酯水平的作用,其水平在急性脑梗死患者与正常人群之间无明显差异.ApoAV-1131 C等位基因是脑梗死的独立危险因素,其与甘油三酯水平升高有关,但与apoAV水平无关.
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apoAV-1131T＞C 基因多态性与非酒精性脂肪性肝病的关系研究
[目的]了解载脂蛋白 AV（apoAV）‐1131T＞C基因多态性和 apoAV 水平与非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的关系。[方法]对78例B超确诊为NAFLD患者（NAFLD组）和58例同期体检示非 NAFLD者（对照组），采用酶联免疫吸附试验检测血清 apoAV 浓度进行测定，通过聚合酶联反应‐限制性长度多态性方法进行apoAV‐1131 T＞C基因多态性分析。[结果]NAFLD组的apoAV水平低于对照组、TC基因型频率高于对照组（均P＜0.05）；TC＋CC基因型的血清apoAV水平低于TT基因型、血清三酰甘油水平高于TT基因型（均 P＜0.05）。[结论]apoAV‐1131 T＞C位点影响血清apoAV和三酰甘油水平，增加了NAFLD的发病风险。
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树鼩载脂蛋白AV基因的克隆、表达和纯化
目的 构建树鼩载脂蛋白AV原核表达载体并利用His标签纯化该蛋白.方法 从树鼩肝细胞中提取总RNA,经逆转录合成cDNA第一链,以cDNA第一链为模板,扩增载脂蛋白AV基因.PCR扩增产物和pET32a原核表达载体经过双酶切,将纯化回收的酶切产物按适当的摩尔比通过T4 DNA连接酶16℃连接过夜,连接产物转化大肠杆菌感受态细胞Top10,挑克隆测序.将克隆成功的载脂蛋白AV重组质粒转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,并优化诱导条件.表达的载脂蛋白AV经镍离子螯合树脂纯化,采用BCA法分析蛋白浓度,纯度测l定采用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合薄膜凝胶扫描分析获得.结果 挑选的克隆经测序证实载脂蛋白AV基因已经成功连接入pET32a原核表达载体中.在大肠杆菌BL21(DE3)中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,有分子量大小约60 kDa的特异性蛋白产生,与预期大小一致.重组蛋白诱导的佳表达时间为5h左右,佳浓度约在20 μmol/L.镍离子螯合树脂柱亲和层析获得的纯化蛋白,经过聚丙烯酰胺凝胶电泳后薄膜凝胶扫描分析显示目的蛋白的纯度在95％以上.结论 成功构建了载脂蛋白AV的原核表达载体,该蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了高效表达,纯化后的载脂蛋白AV纯度约95％,为进一步研究其结构与功能奠定了基础.
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影响血浆甘油三酯代谢的新基因
随着生活环境的改变,高甘油三酯血症已经成为为常见的病症之一.血浆甘油三酯的代谢受到众多基因的调控.进入二十一世纪以来,几种明显影响血浆甘油三酯水平的新基因(载脂蛋白AV、糖基化磷脂酰肌醇锚定高密度脂蛋白结合蛋白1和脂肪酶成熟因子1)相继被发现,其作用主要是通过影响脂蛋白脂肪酶而实现.对这几种基因的研究,丰富了人们对血浆甘油三酯代谢调控的认识,并为预防和控制高甘油三酯血症提供了新的途经.
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载脂蛋白AV与血脂代谢研究新进展
新发现的载脂蛋白AV参与血脂代谢,尤其是在三酰甘油分解代谢中起重要作用.载脂蛋白AV通过减少脂蛋白的生成率、增强脂蛋白脂酶对三酰甘油的水解,促进低密度脂蛋白受体介导的富含三酰甘油的脂蛋白颗粒清除作用来调节血脂代谢.载脂蛋白AV的基因多态性与心血管疾病的发生有着密切的关系.
