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反相高效液相色谱结合柱前衍生化法测定人血清中L-门冬酰胺
目的:建立反相高效液相色谱法( RP - HPLC)快速准确测定人血清中L-门冬酰胺(L- ASN).方法:用已耗竭LASN的人血清为空白生物基质建立标准曲线,邻苯二甲醛在线柱前衍生样品,ZORBAX Eclipse AAA柱(4.6mm×150 mm,5μm)分离衍生化产物.采用内标法根据荧光响应值定量分析.结果:L- ASN与内标高丝氨酸的衍生物均在16 min内出峰,在2～100 μmol·L-1的范围内方法线性关系良好(r ＞0.999),低定量限为2μmol·L-1,日内与日间精密度(RSD)均小于12.9％,回收率在96.9％～108.3％之间,平均提取回收率为58.2％,血清中L-ASN -80℃冻存四周保持稳定.结论:建立了RP - HPLC结合柱前衍生化测定人血清中L- ASN的方法,并应用于临床血清样品中L- ASN的定量测定.
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氯氮平血药浓度快速测定方法的研究
建立了一种反相高效液相色谱法测定人血清中氯氮平浓度.采用μ Bondapak C18(300 mm×3.9 mm,10 μm)柱,甲醇-水-三乙胺(78∶22∶0.5,冰醋酸调pH 8.0)为流动相,检测波长600 nm(0→2.5 min),230 nm(2.5→6.0 min),流速1.4 mL/min,柱温45 ℃,灵敏度0.001AUFS,选用安定为内标,血清样品经75 %三氯醋酸沉淀蛋白后直接进样测定.线性范围50.4～1176 ng/mL,r=0.9996(n=7),平均回收率100.9 %～102.9 %(RSD＜5.0 %,n=3).日内RSD＜2.56 %,日间RSD＜3.25 %,n=16.
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超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱对血清中结合型胆汁酸的定性分析研究
目的:采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱仪,负离子模式下定性分析血清中结合型胆汁酸.方法:利用全信息串联质谱(MSE)技术,在1次液质分析中同时获得高精确离子质量的母离子及碎片离子信息,利用两者具有的相同色谱行为特性进行母-子离子的关联归属,定性分析血清中结合型胆汁酸.结果:分析健康人血清与肝病患者血清中结合型胆汁酸,终定性出4种甘氨结合型胆汁酸(G-BAs),4种甘氨结合型胆汁酸硫酸酯(G-BA-Ss),4种牛磺结合型胆汁酸(T-BAs)和1种牛磺结合型胆汁酸硫酸酯(T-BA-S).结论:建立全信息串联质谱技术(MSE)法鉴定血清中结合型胆汁酸,为胆汁异常相关疾病的研究提供了良好的分析工具.
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顺磁性微粒子化学发光免疫分析法检测血清叶酸的性能评价
目的:评估顺磁性微粒子化学发光免疫分析法(chemiluminescence microparticle immunoassay,CMIA)检测血清叶酸的分析性能,证实其是否能满足实验室需求.方法:应用美国临床和实验室标准化协会(CLSI) EP5-A2、EP15-A2、EP7-A2、EP6-A、C28-A3c方法评价CMIA检测叶酸的精密度、正确度、抗干扰性、分析测量范围(AMR)、临床可报告范围(CRR)、生物参考区间及叶酸样本在不同温度、光照条件下的稳定性.结果:叶酸浓度在2.68 ～28.17 nmol·L-1时,批内、批间精密度均小于厂家声明的标准.正确度验证显示测定有证参考物质NIST SRM 1955,结果符合验证要求;检测美同病理学家协会室间质评物(K-C)、校准验证/线性评价物(LN5-B)显示,结果均符合美国病理学家协会校准验证/线性评价误差界限所规定的标准,叶酸浓度在1.26 ～30.83 nmol· L-1范围内通过线性验证,95％验证区间也包含其指定均值,相对偏差均小于卫生部临床检验中心室间质量评价标准(TEa:靶值±30％),但结果整体水平偏低,尤其低水平明显,大相对偏差达-28.44％.抗干扰性评估显示在甘油三脂(TG)浓度≤20 mmol·L-1、胆红素(Bil)浓度≤400 μmol·L-1、维生素C质量浓度≤2.0g·L-1时对叶酸检测系统CMIA无显著干扰.AMR验证判断佳拟合方程为二元一次多项式,叶酸浓度在0～ 45.31 nmol·L-1范围内存在线性关系.CRR上限为6796.5 nmol·L-1,大稀释倍数为150倍.生物参考区间验证显示本研究选择的参考个体叶酸总体水平低于美国人群叶酸水平,男性叶酸水平低于女性叶酸水平.温度、光照的稳定性试验提示血清叶酸标本常温保存不宜超过2d.结论:CMIA检测血清叶酸的各项性能指标基本满足实验室要求.样本密封、避光和低温保存稳定性较好.实验室需结合地区饮食差异,建立或验证生物参考区间.
